メカノレセプターTRPV4による椎間板変性に対する治療アプローチ

机械感受器TRPV4治疗椎间盘退变的方法

基本信息

批准号：
22K16743
负责人：
武岡由樹
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究の目的は、ラット椎間板においてTransient receptor potential vanilloid-4 (TRPV4)の抑制および活性化が恒常性維持、すなわちオートファジーと細胞外基質代謝に与える影響を明らかにすることである。2022年度はラット尾椎椎間板髄核細胞を用いて細胞実験を行った。機能欠失実験ではTRPV4 siRNAをリバーストランスフェクション法で細胞に導入し、炎症刺激(IL-1β添加）条件下で、タンパクを抽出してオートファジーマーカーや細胞外基質同化因子・異化関連因子をウェスタンブロット法で評価した。TRPV4の抑制により、オートファジーの有意な抑制（p62/SQSTM1の低下とLC-IIの増加）と、細胞外基質同化因子（Aggrecan, Collagen type II, TIMP1, TIMP2）の有意な減少、異化関連因子（MMP3, MMP13）の有意な増加を認めた。また、TUNEL染色を用いた細胞生存率の評価では、TRPV4抑制により細胞生存率の有意な低下を認めた。機能獲得実験では、TRPV4アゴニストを添加して細胞を培養し、同様に炎症刺激条件も設けて、オートファジーと細胞外基質の評価をウェスタンブロット法で行った。炎症刺激下において、アゴニストによるTRPV4の活性化によりオートファジーマーカーの有意な増加を認め、細胞外基質同化因子の有意な増加と、異化関連因子の有意な低下を認めた。さらに、アポトーシスマーカーを評価し、アポトーシスの抑制（Cleaved PARP, Cleaved Caspase 9の低下とPARPの増加）が示された。

这项研究的目的是阐明瞬态受体电势-4（TRPV4）对大鼠椎间盘中自噬和细胞外基质代谢的抑制和激活对稳态的影响。在2022年，使用大鼠尾盘核细胞进行细胞实验。在功能缺失实验中，使用反向转染将TRPV4 siRNA引入细胞中，并在炎症刺激的条件下提取蛋白质（IL-1β添加）和自噬标记物以及细胞外基质基质基质因子和分解代谢相关因子，通过蛋白质印刷评估了与分解代谢相关的因子。 TRPV4的抑制作用显着抑制自噬（p62/sqSTM1降低和LC-II增加），细胞外基质合成代谢因子（Aggrecan，II型，TIMP1，TIMP2）的显着降低，以及在分析因子（MMMPPU，MMPPU）的显着增加。此外，当使用TUNEL染色评估细胞活力时，TRPV4的抑制作用显着降低了细胞活力。在功能获得实验中，通过添加TRPV4激动剂来培养细胞，还提供了类似的炎症刺激条件，并通过蛋白质印迹评估了自噬和细胞外基质。在炎症刺激下，激动剂对TRPV4的激活显示出显着增加的自噬标记物，细胞外基质合成代谢因子显着增加，并且与分解代谢相关的因子显着下降。此外，评估凋亡标记并抑制凋亡（裂解的PARP，切割的caspase 9并增加了PARP）。

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Transient Receptor Potential Vanilloid 4 (TRPV4) knockdown decreases extracellular matrix synthesis via autophagy suppression in rat intervertebral disc

瞬时受体电位 Vanilloid 4 (TRPV4) 敲低通过抑制大鼠椎间盘自噬减少细胞外基质合成

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tomoya Matsuo;Yoshiki Takeoka;Zhongying Zhang;Takashi Yurube;Kunihiko Miyazaki;Hiroki Ohnishi;Masao Ryu;Naotoshi Kumagai;Kohei Kuroshima;Yoshiaki Hiranaka;Ryosuke Kuroda;Kenichiro Kakutani
通讯作者：
Kenichiro Kakutani

ラット椎間板においてTransient Receptor Potential Vanilloid 4 (TRPV4)がオートファジーと細胞外マトリクス合成へ与える影響

瞬时受体电位 Vanilloid 4 (TRPV4) 对大鼠椎间盘自噬和细胞外基质合成的影响

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
松尾智哉;武岡由樹;張鍾穎;由留部崇;宮崎邦彦;大西洋輝;劉正夫;熊谷直利;黒島康平;平中良明;黒田良祐;角谷賢一朗
通讯作者：
角谷賢一朗

Transient Receptor Potential Vanilloid 4 (TRPV4) activation promotes autophagy and increases extracellular matrix synthesis through AMPK pathway in rat intervertebral disc cells

瞬时受体电位 Vanilloid 4 (TRPV4) 激活促进大鼠椎间盘细胞自噬并通过 AMPK 途径增加细胞外基质合成

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kohei Kuroshima;YoshikiTakeoka;Zhongying Zhang;Takashi Yurube;Kunihiko Miyazaki;Hiroki Ohnishi;Masao Ryu;Tomoya Matsuo;Naotoshi Kumagai; Yoshiaki Hiranaka;Ryosuke Kuroda;Kenichiro Kakutani
通讯作者：
Kenichiro Kakutani