ANXA2－OSMR経路が構築する膠芽腫エコシステムと治療抵抗性機序の解明

阐明ANXA2-OSMR通路构建的胶质母细胞瘤生态系统和治疗耐药机制

• 批准号: 22K16658
• 负责人: 松本 悠司
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16658/
• 关键词: annexin A2; oncostatin M receptor; 微小環境; 膠芽腫; 抗腫瘍免疫応答

公共のデータセットを用いた解析では、膠芽腫のsubtypeの中で最も予後不良なmesenchymal subtype、ANXA2高発現患者それぞれで骨髄系細胞の浸潤が多いことが分かった。また、免疫染色を用いた自施設膠芽腫患者の解析でも、ANXA2およびOSMRの発現と腫瘍関連マクロファージの浸潤は相関が認められた。更に、ヒト膠芽腫組織を用いたsingle cell RNA-seq解析よりOSMや免疫抑制系細胞のCCL2は主に骨髄系細胞から分泌され、ANXA2－OSMR経路は細胞外からのOSM依存性にANXA2の発現を増加させ正のフィードバックループを形成することが分かった。これらの結果により、ANXA2－OSMR経路は骨髄系細胞に作用して抗腫瘍免疫応答を抑制する微小環境を形成し、さらに骨髄系細胞とOSMを介して正のフィードバックループを形成しこの経路をより活性化することが示唆されている。現在、患者由来膠芽腫幹細胞に対してウイルスベクターを用いてANXA2を恒常的に過剰発現した細胞およびOSMRを発現抑制した細胞を樹立し、これらをヒト化マウスおよびC57Bl/6マウスに移植し、免疫染色およびflow cytometryを用いて免疫細胞の浸潤を評価をしている段階である。また、ヒト末梢血単核細胞から分化させたマクロファージやヒト単球細胞株、マウス骨髄系細胞株などを準備しており、ANXA2過剰発現膠芽腫細胞、OSMR発現抑制膠芽腫細胞を用いてtranswell assayを行い、マクロファージやマイクログリアの遊走能の変化を評価中である。

使用公共数据集的分析表明，髓样细胞侵袭在间充质亚型和AnxA2高表达患者中更为常见，这两者都是胶质母细胞瘤亚型的最差的预后。此外，在使用免疫染色的机构胶质母细胞瘤患者的分析中，Anxa2和OSMR的表达与肿瘤相关巨噬细胞的侵袭之间存在相关性。此外，使用人胶质母细胞瘤组织的单细胞RNA-seq分析表明，免疫抑制细胞中的OSM和CCL2主要分泌于髓样细胞，而AnxA2-OSMR途径会增加细胞外OSM依赖性的Anxa2的表达，形成阳性反馈回合。这些结果表明，ANXA2-OSMR途径作用于髓样细胞，形成一种微环境，可抑制抗肿瘤免疫反应，并通过髓样细胞和OSM形成正反馈环，进一步激活该途径。当前，使用病毒载体为患者来源的胶质母细胞瘤干细胞建立了过表达AnxA2和抑制OSMR的细胞，将其植入人源化小鼠和C57BL/6小鼠中，并使用免疫染色和流式细胞仪来评估免疫细胞渗透率。我们还准备了巨噬细胞，人类单核细胞系，小鼠髓样细胞系等与人外周血单核细胞区分开的，目前正在使用AnxA2过表达的胶质母细胞瘤细胞和OSMR胶质母细胞瘤细胞进行Transwell分析，以评估元素和微乳突的迁移型变化。