細胞外小胞の革新的サーフェスオーム解析を用いた肺癌早期診断バイオマーカーの開発

利用细胞外囊泡的创新表面欧姆分析开发用于肺癌早期诊断的生物标志物

基本信息

批准号：
22K16566
负责人：
加藤毅人
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16566/
关键词：
エクソソーム肺癌バイオマーカー細胞外小胞

项目摘要

①患者検体収集：2022年1月より患者血漿の収集を開始し現在までに約700の血漿検体を収集できた。今後も検体収集については継続して行っていく。②細胞培養上清由来と腫瘍由来EVの比較：細胞株上清由来ＥＶと腫瘍由来EVの比較をNanosightによるparticle countと透過電子顕微鏡による比較を行ったところ、両者は非常に類似しており、腫瘍検体からもEVの抽出が可能であることを確認できた。③腫瘍由来EVによるプロテオミクス解析：上記で示した腫瘍由来EVを用いてDTSSPラベリングを行った上でプロテオミクス解析を行ったが十分な数のサーフェスタンパクの検出には至らなかった。そこでTMT10plexラべリングにて腺癌、扁平上皮癌、正常肺、細胞株由来のＥＶを比較することとした。そのデータからいくつかの新規バイオマーカーターゲット候補が得られた。今後そのデータからエクソソーム表面にあると考えられるタンパクをピックアップしてEVアッセイを行っていく。④超高感度EVアッセイの開発：まずは細胞株由来のEVとPBSを使用してEVを正しく検出できるかを磁気ビーズ＋EV特異的ペプチドにて確認したところいくつかの有力なペプチドが見つかった。今後このペプチドを利用したアッセイの開発を進めていく予定である。超高感度アッセイの感度は問題ないと考えるが特異度の点でまだ課題がある。感度・特異度両方が満たされるようなアッセイの開発を継続する。

① 患者标本采集：我们于 2022 年 1 月开始采集患者血浆，迄今已采集约 700 份血浆标本。今后我们将继续采集标本。 ② 细胞培养上清液来源的 EV 和肿瘤来源的 EV 的比较：使用 Nanosight 颗粒计数和透射电子显微镜对细胞系上清液来源的 EV 和肿瘤来源的 EV 进行比较，结果表明它们非常相似，证实了 EV 可以进行比较。也从肿瘤标本中提取。 ③ 使用肿瘤来源的 EV 进行蛋白质组学分析：使用上图所示的肿瘤来源的 EV 进行 DTSSP 标记后进行蛋白质组学分析，但无法检测到足够数量的表面蛋白。因此，我们决定使用 TMT10plex 标记比较来自腺癌、鳞状细胞癌、正常肺和细胞系的 EV。这些数据产生了几种新颖的生物标志物候选目标。将来，我们将利用这些数据来提取被认为位于外泌体表面的蛋白质并进行 EV 测定。 ④ 超灵敏 EV 检测的开发：首先，我们确认使用细胞系来源的 EV 和使用磁珠 + EV 特异性肽的 PBS 是否可以正确检测 EV，并发现了几种强大的肽。将来，我们计划开发使用这种肽的检测方法。尽管我们认为超灵敏检测的灵敏度不是问题，但特异性仍然存在问题。我们将继续开发同时满足灵敏度和特异性的检测方法。