関節リウマチ患者の滑膜一細胞解析によるTNF-α阻害剤反応性予測マーカーの探索

通过类风湿关节炎患者滑膜单细胞分析寻找 TNF-α 抑制剂反应性的预测标记

• 批准号: 22K16354
• 负责人: 土屋 遥香
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16354/
• 关键词: 関節リウマチ; 滑膜; シングルセル解析

令和4年度は、RA分類基準（ACR/EULAR 2010年）を満し、発症早期（1年以内）、MTX-IR（MTXが3か月以上投与されても低疾患活動性以下に未到達）の患者から、研究内容に関して文書説明と同意を取得した。同意が得られた患者から、治療開始前の臨床情報（年齢・性別・自己抗体・疾患活動性評価指標・身体機能障害評価指標等）、関節滑膜（超音波ガイド下滑膜針生検などを用いて採取）・末梢血を収集した。関節滑膜の細胞懸濁液から分離した単核球に、CITE-seq抗体の添加と免疫蛍光染色を施し、フローサイトメーターを用いて生細胞を分取した（1検体あたりの目安: 10,000細胞）。10x Genomics Chromiumシステムを用いてシングルセルライブラリーを調整した。この一連の工程において、データの質の担保とコスト削減の両立を目指すため、プロトコルを改善した。

2020财年，满足RA分类标准（ACR/EULAR 2010），包括早发（1年内）、MTX-IR（即使在MTX给药3个月或更长时间后仍未达到低疾病活动度或以下）。获得患者的知情同意和关于研究内容的知情同意。从同意的患者中获取治疗开始前的临床信息（年龄、性别、自身抗体、疾病活动性评价指标、身体功能障碍评价指标等）、关节滑膜（超声引导下的滑膜穿刺活检等）·外周血集。从关节滑膜细胞悬液中分离的单核细胞添加CITE-seq抗体并进行免疫荧光染色，并使用流式细胞仪对活细胞进行分选（估计：每个样品10,000个细胞）。使用 10x Genomics Chromium 系统制备单细胞文库。在这一系列步骤中，我们改进了协议，以确保数据质量并降低成本。