Elucidating excessive fibrosis in systemic sclerosis via abnormal IRF8 expression

通过 IRF8 表达异常阐明系统性硬化症中的过度纤维化

基本信息

批准号：
22K16287
负责人：
乙竹泰
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2027-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16287/
关键词：
全身性強皮症 IRF8 線維化

项目摘要

①骨髄特異的IRF8ノックアウトマウス（IRF8cKOマウス）の肺組織について評価を行った。(i)まず、無治療のIRF8cKOマウスと野生型マウスの肺組織の比較を行った。IRF8cKOマウスで肺の線維化は認めず、同マウスは肺において線維化を自然発症しないと考えた。(ii)次に、線維化を誘導するためにブレオマイシンの投与を行った。ブレオマイシンの投与経路については、背部の皮下投与および気管内投与の2種類の方法を採用した。肺組織については、重量、病理組織、qRT-PCR、総コラーゲン量測定（ヒドロキシプロリンアッセイ）によって線維化の評価を行った。皮下投与においては野生型マウスと比較してIRF8cKOマウスにおいて線維化の亢進は見られなかった。気管内投与においても一部でIRF8cKOマウスにおいて線維化の亢進を示唆する所見は見られたものの、野生型と比して統計学的に有意な線維化誘導は認めなかった。②今後の組織からのマクロファージ抽出を念頭に、皮膚や肺組織について組織からの細胞抽出の予備実験を行った。マウスの皮膚、肺についてコラゲナーゼを用いて組織の溶解を行ったが、特に皮膚において分解に難渋したたため、条件の最適化にむけて実験を継続する。③今後の線維芽細胞との共培養を念頭に、ヒト単球におけるIRF8のノックダウンについて予備実験を行った。siRNAを用いたRNA干渉法によるノックダウンを行った。これまで当教室で使用しておりノックダウン方法が確立した試薬の販売停止に伴い、新たな試薬を用いて条件検討を行った。ノックダウン効率がまだ低いため、今後も最適化のための実験を継続する。

（1）评估了骨髓特异性IRF8敲除小鼠（IRF8CKO小鼠）的肺组织。（i）首先，进行了未处理的IRF8CKO小鼠与野生型小鼠肺组织之间的比较。 IRF8CKO小鼠不允许肺纤维化，小鼠认为纤维化不会在肺中自然发展。（ii）接下来，我给予半霉素来指导纤维化。对于盲霉素给药途径，采用了两种类型的方法，即背部和内部气管的皮下给药。对于肺组织，通过重量，病理组织，QRT-PCR和总胶原蛋白体积测量（羟基PRYLIN分析）评估纤维化。在皮下给药中，与野生小鼠相比，IRF8CKO小鼠没有更多的纤维化。尽管某些IN -Partheal给药表明IRF8CKO小鼠的纤维化增加，但与野生型相比，没有统计纤维诱导。（2）对皮肤和肺组织的细胞提取细胞提取细胞进行了初步实验，将来会从组织中提取巨噬细胞。使用胶原酶在小鼠的皮肤和肺上溶解组织，但在皮肤上分解特别困难，并且实验继续以优化条件。（3）对人类单球的IRF8敲低进行了初步实验，未来的CO文化与纤维细胞。使用siRNA通过RNA干扰击倒。到目前为止，已经使用新试剂暂停销售试剂进行了检查，该试剂已在该课堂中使用，并已被建立用于敲门方法。敲低效率仍然很低，因此我们将继续实验以进行优化。