RNA認識受容体の2型自然リンパ球制御機構から見た気管支喘息新規治療探索

从RNA识别受体2型先天淋巴细胞调节机制探索支气管哮喘新疗法

• 批准号: 22K16165
• 负责人: 石井 崇史
• 金额: $ 3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16165/
• 关键词: 気管支喘息; 自然免疫系; ２型自然リンパ球; 自然免疫

野生型マウスとMDA5KOマウスから２型自然リンパ球(ILC2)を分離するためにマウスにIL-33を点鼻投与し、一定期間後に気管支肺胞洗浄液と肺を回収した。気管支肺胞洗浄液中の好酸球は両群で顕著な差は認めなかった。回収肺に酵素処理を行うことで単細胞懸濁液を得て蛍光抗体を用いてILC2を分離した。肺ILC2総数に関しては両群で軽度の相違が示唆された。分離したILC2を細胞培養プレートに播種し、IL-33やRNA系自然免疫受容体活性化物質(5’ppp-RNA, HMW polyI:C)を用いて刺激し、一定時間経過後に細胞上清とRNAを回収し、IL-13タンパク濃度や遺伝子発現をELISA, qPCR法で測定した。結果、野生型マウスILC2においてIL-33刺激により期待通りにIL-13が高濃度に分泌される事を確認した。一方、MDA5KOILC2ではIL-13濃度に軽度の差異が認められた。5’ppp-RNA, HMW polyI:C刺激ではIL-13は微量産生にとどまった。qPCRではIL-13では上記所見に矛盾しない結果が得られた。ILC2は高度に放出するとして有名なIL-5/IL-13以外にも様々なサイトカイン含めた液性因子を産生するが、現在その他の遺伝子に関して検討している。また、アレルゲンを用いた気管支喘息モデルの作成と表現型解析は、一部完了している。今後はRNA系自然免疫受容体活性化物質刺激によるILC2活性変化の生体内における役割や、RNA系自然免疫受容体自体がアレルギー性気道炎症のどのように関与するかを解明していく。

为了将2型天然淋巴细胞（ILC2）与野生型和MDA5KO小鼠分开，对小鼠进行了鼻腔注射IL-33，并在一段时间后收集支气管肺泡灌洗液和肺。两组之间的支气管肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞没有显着差异。在收集的肺上进行酶促处理以获得单细胞悬浮液，并使用荧光抗体分离ILC2。两组之间提出了肺ILC2总数的轻度差异。将分离的ILC2播种在细胞培养板上，用IL-33或基于RNA的先天免疫受体激活剂（5'PPP-RNA，HMW Polyi：C）刺激，在一段时间内，收集了细胞上清液和RNA，并通过ELISA或QPCR测量了IL-13蛋白质浓度和基因表达。结果，已经证实，IL-13在野生型小鼠ILC2中被高浓度分泌，如IL-33刺激所预期的那样。另一方面，在MDA5KOILC2中观察到IL-13浓度的轻度差异。 5'PPP-RNA，HMW Polyi：C刺激仅允许IL-13的痕量产生。 QPCR显示出与IL-13的上述发现一致的结果。除了以高度释放特性而闻名的IL-5/IL-13外，ILC2还会产生包括各种细胞因子在内的体液因素，但目前正在研究其他基因。此外，已经完成了使用过敏原和表型分析的支气管哮喘模型的创建。将来，我们将探讨由体内刺激基于RNA的先天免疫受体激活剂引起的ILC2活性变化的作用，以及基于RNA的先天免疫受体本身如何参与过敏性气道炎症。

项目成果

RNA-recognizing immune sensor regulates bleomycin-induced activation of macrophages, lymphocytes, and neutrophils and subsequent lung fibrosis

RNA识别免疫传感器调节博来霉素诱导的巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的激活以及随后的肺纤维化

• 发表时间: 2022
• 作者: 園田桂子;永瀬聡;相庭武司;加藤浩一;志賀剛;草野研吾; 堀江稔;大野聖子;Takashi Ishii Yusuke MurakamiTomoya Narita Takahide Nagase Naomi Yamashita
• 通讯作者: Takashi Ishii Yusuke MurakamiTomoya Narita Takahide Nagase Naomi Yamashita