ウイルス療法を基軸とした大腸癌に対する複合がん免疫療法の開発

基于病毒疗法的结直肠癌复杂癌症免疫疗法的开发

• 批准号: 22K16002
• 负责人: 杉村 直美
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16002/
• 关键词: 大腸癌; 腫瘍溶解性ウイルス; 免疫療法

本年度は、マウス大腸がん細胞株を用いたレオウイルスおよびSTING agonist, ADU-S100の有効性について、in vitroおよびin vivoでの検証を行う。またレオウイルスにより免疫原性細胞死(ICD;immunogenic cell death)がもたらされるかについても検証する。マウス大腸がん細胞株としては、CT26およびMC38を用いる。レオウイルスの有効性について、各細胞に、1MOI,3MOI,10MOI濃度のレオウイルスを感染させ、感染後24時間、48時間、72時間後に細胞増殖アッセイによりレオウイルスの有効性を評価する。同様に、培養液中にSTING agonist, ADU-S100を添加し、その有効性について検証する。レオウイルスによるICDについては、レオウイルスを感染させた細胞の培養液中のATP、HGMB-1を計測することで評価する。マウスを用いた実験では、免疫力の保持されたBALB/cマウスの皮下にCT26を移植する同種移植マウスモデルを用いる。まずは、マウスに移植したCT26が腫瘍を形成したところで、腫瘍内に直接、レオウイルスを投与し、腫瘍増殖抑制能を評価する。STING agonist, ADU-S100についても同様に、担がんマウスに投与し、腫瘍増殖抑制能を評価する。さらに、レオウイルおよびADU-S100を併用投与したマウスの腫瘍についても増殖能を評価する。また、レオウイルス、ADU-S100による腫瘍増殖抑制効果だけではなく、腫瘍細胞に与える影響を免疫染色により評価する。これらの抗腫瘍薬を投与後に、マウスから腫瘍を摘出する。ホルマリンで固定後に、Ki67、Cleaved Caspase-3、Granzyme Bの免疫染色を行い、細胞障害の誘導、抗腫瘍免疫の誘導について評価する。

今年，我们将利用小鼠结肠癌细胞系在体外和体内验证呼肠孤病毒和 STING 激动剂 ADU-S100 的有效性。我们还将检查呼肠孤病毒是否会导致免疫原性细胞死亡（ICD）。 CT26和MC38用作小鼠结肠癌细胞系。关于呼肠孤病毒的有效性，每个细胞以1 MOI、3 MOI或10 MOI的浓度感染呼肠孤病毒，感染后24小时、48小时和72小时通过细胞增殖测定评估呼肠孤病毒的有效性。同样，将 STING 激动剂 ADU-S100 添加到培养液中并验证其有效性。通过测量感染呼肠孤病毒的细胞的培养基中的ATP和HGMB-1来评估呼肠孤病毒引起的ICD。对于使用小鼠的实验，将使用同种异体移植小鼠模型，其中CT26被皮下移植到免疫保存的BALB/c小鼠中。首先，一旦CT26移植到小鼠体内形成肿瘤，呼肠孤病毒将直接注射到肿瘤中，并评估其抑制肿瘤生长的能力。 STING 激动剂 ADU-S100 也将被给予荷瘤小鼠，以评估其抑制肿瘤生长的能力。此外，还将评估经呼肠孤病毒和ADU-S100处理的小鼠肿瘤的增殖能力。此外，我们不仅将评估呼肠孤病毒和ADU-S100的肿瘤生长抑制作用，还将通过免疫染色评估它们对肿瘤细胞的影响。施用这些抗肿瘤药物后，将小鼠体内的肿瘤切除。用福尔马林固定后，对 Ki67、Cleaved Caspase-3 和 Granzyme B 进行免疫染色，以评估细胞损伤和抗肿瘤免疫的诱导。