Regulatory mechanism and functional analysis of transcription factor Forkhead box F2 expression in esophageal cancer.

食管癌转录因子Forkhead box F2表达的调控机制及功能分析

• 批准号: 22K15975
• 负责人: 東森 啓
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15975/
• 关键词: FOXF2; 食道癌; Wnt/βカテニン; 上皮間葉移行

食道癌細胞株(TE1,TE4,TE5,TE6,TE8,TE9,TE10,TE11,TE14,TE15)と及び食道正常細胞株(Het-1A)とヒト正常食道生検検体を用いて、癌部と非癌部でのFOXF2発現をreal time PCR法で検討した。ヒト食道検体やHet-1Aに比べてTE6,8,10,15などの食道癌細胞株でFOXF2発現が低下していることを確認した。また、食道癌細胞株と食道正常細胞株およびヒト食道検体でのメチル化の有無をバイサルファイトシーケンス解析で確認した。各検体から抽出したDNAをバイサルファイト処理後、プロモーター領域のGCサイトのメチル化の程度をシークエンス解析し比較した。ヒト食道正常検体ではプロモーター領域のメチル化は認めなかったが、食道癌細胞株では高頻度にメチル化が起こっていることを確認した。しかしFOXF2発現とメチル化の程度の相関は低く、メチル化以外のエピジェネテッィクな制御機構が関与している可能性が示唆された。また表在食道癌内視鏡的粘膜下層剥離術後のホルマリン検体を用いて、レーザーマイクロダイセクション法により、癌近傍正常組織と癌組織でのFOXF2発現を検討した。抽出条件の検討により高品質のRNA抽出が可能であったが、癌近傍正常部と癌部での明らかなFOXF2発現の差は認めなかった。今後は、内視鏡的切除病変だけでなく、外科手術標本での検討も行っていく予定である。また、FOXF2蛋白発現についても免疫染色法で検討を行い、非癌部に比べて癌部でFOXF2発現が低下していることをDAB染色法により確認した。

食管癌细胞的储备（TE1，TE4，TE4，TE5，TE6，TE9，TE9，TE10，TE11，TE14，TE14，TE15）和食管正常细胞库存（HET -1A）和人类正常的食管生物检查和癌症。通过实时PCR方法检查了癌症。已经证实，与人类食管和HET-1A相比，食管癌细胞（例如TE6,8,10、15）降低了FOXF2的表达。此外，通过对食管癌细胞，食管正常细胞和人类食管标本中甲基化的存在或不存在的Bissal战斗序列分析证实了Visal战斗序列分析。从每个样品中提取的DNA进行粘性战斗处理后，分析并比较了启动子区域中GC位点的甲基化程度。尽管不允许在人类食管正常样品的启动子区域中甲基化，但已证实食管癌细胞经常是陈述的。然而，FOXF2表达与甲基化之间的相关性很低，这表明可能涉及甲基化以外的表观构思控制机制。此外，使用激光显微镜方法使用专用染色的癌症内窥镜粘膜粘膜粘膜粘膜征服征服的激光微观方法进行了激光微部。通过检查提取条件，可以进行高质量的RNA提取，但是癌症正常部分与癌症区域之间明显的FOXF2表达之间没有差异。将来，我们计划不仅考虑内窥镜切除病变，还要考虑手术标本。此外，还通过免疫学方法检查了FOXF2蛋白的表达，并通过DAB染色方法证实了DAB染色方法，即与非癌症相比，癌症区域中FOXF2表达降低。