筋強直性ジストロフィーの平滑筋障害機構の原因解明

强直性肌营养不良平滑肌损伤机制的阐明

基本信息

批准号：
22K15730
负责人：
蓮池裕平
金额：
$ 3万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15730/
关键词：
筋強直性ジストロフィー

项目摘要

筋強直性ジストロフィー（DM）は、CTGやCCTGといった塩基繰り返し配列（リピート）の異常伸長が原因の遺伝性筋疾患である。DMでは変異遺伝子より転写された、異常伸長リピートをもつRNAが核内で凝集体を形成し、スプライシング制御因子を障害することで、スプライシング制御機構の破たんを来す。DMでみられる筋強直や心伝導障害は塩化物チャネル、ナトリウムチャネルのスプライシング異常が原因とされている。一方で、DMの多彩な症状のなかで消化管機能異常、中枢神経障害などは平滑筋との関連が示唆されるが、原因は全く解明されていない。当該年度はこうしたDMでの平滑筋障害機構を解明するために、最適なモデル細胞を作製した。pDWDプラスミドコンストラクトを用いて、ADER法により異常伸長リピートを持つCTG繰り返し配列を合成した。これをpLLC16プラスミドコンストラクト内のDMPK 3’UTR配列に挿入し、ヒト平滑筋細胞に導入してstable cloneを確立した。Creリコンビナーゼ処理によるリピート発現を誘導したDM1平滑筋モデル細胞では、DM骨格筋でみられる核内RNA凝集体形成が誘導されることを確認した。

肌发育症（DM）是一种由CTG和CCTG等重复碱序列异常伸长引起的遗传性肌肉疾病。在DM中，由突变基因转录的RNA具有异常伸长的重复序列形式，形成了核中的聚集体，损害了剪接调节因子，从而导致剪接控制机制分解。 DM中看到的肌动感和心脏传导障碍被认为是由氯化物和钠通道异常剪接引起的。另一方面，在DM的各种症状中，胃肠道功能障碍和中枢神经系统疾病被认为与平滑肌有关，但根本没有澄清原因。在今年，产生了最佳模型细胞，以阐明DM期间平滑肌损伤的机制。使用PDWD质粒构建体，通过ADER合成具有异常扩展重复序列的CTG重复序列。将其插入PLLC16质粒构建体中的DMPK 3'UTR序列中，并引入人类平滑肌细胞中以建立稳定的克隆。我们证实，在DM1平滑肌模型细胞中看到的核RNA聚集体形成，这些细胞通过CRE重组酶处理诱导重复表达。