視神経脊髄炎におけるセルフリーDNAを介した内因性自然免疫活性化機構の解明

阐明视神经脊髓炎中游离DNA介导的内源性先天免疫激活机制

• 批准号: 22K15708
• 负责人: 村田 尚
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15708/
• 关键词: NETosis; 視神経脊髄炎

先行実験でNMOSD患者血清では好中球由来のcell-free DNA濃度が上昇していたことから、NETosisに着目した。健常者ないしNMOSD患者血清で健常者好中球を刺激、NETosisを誘導し、それを固定せずにSytox-greenでの染色、あるいはNeutrophil ElastaseのELISAでの測定にて評価したところ、NMOSD患者血清刺激群でNETosisは誘導されていることが示された。これらの結果から、NMOSD血清がNETosisの誘導因子を有することが示された。AQP4抗体がNETosisを惹起できるかどうかを検討しているが、患者由来のrecombinant AQP4抗体は好中球におけるNETosisを誘導しなかったことから、NMOSD患者血清においてAQP4抗体以外の因子がNETosisを誘導することが想定された。また、アデノシン受容体は、好中球のcyclic AMP形成を誘発し、過剰なNETosis誘導を制御することが報告されている。さらに、ホスホジエステラーゼ阻害剤であるジピリダモールは、アデノシンの細胞外濃度を上昇させ、cAMPの分解を阻害することが報告されている。NMOSD患者血清によるNETosis誘導がジピリダモールで薬理学的に抑制できるかどうかを検討するため、NMOSD患者血清で刺激した好中球をジピリダモールの存在下および非存在下で培養を行った。その結果、ジピリダモールで処理すると、SYTOX green陽性細胞が有意に減少、Neutrophil Elastaseの誘導の阻害、いずれも見られた。これらのことからNMOSD患者血清はNETosis誘導能を有し、ジピリダモールによって薬理学的介入が可能であることを示した。

在先前的实验中，NMOSD患者的血清中嗜中性粒细胞的无细胞DNA浓度增加，因此我们专注于Netosis。当刺激健康个体或NMOSD患者中性粒细胞中嗜中性粒细胞以诱导Netosis，而没有固定，它们是通过用Sytox-Green染色或用嗜中性粒细胞弹性酶ELISA进行染色来评估的，这表明在NMOSD患者的癌变组中诱导了Netosis。这些结果表明，NMOSD血清具有Netosis的诱导剂。我们正在研究AQP4抗体是否可以诱导Netosis，但是由于患者衍生的重组AQP4抗体并未诱导中性粒细胞中的Netosis，因此假定NMOSD患者血清中AQP4抗体以外的其他因素会诱导Netosis。还据报道，腺苷受体在中性粒细胞中诱导环状AMP形成并调节过度的Netosis诱导。此外，据报道，二吡啶胺是一种磷酸二酯酶抑制剂，可以增加腺苷的细胞外浓度，并抑制CAMP的降解。为了研究NMOSD患者血清诱导的Netosis诱导是否可以在二吡啶胺中抑制药理学，在存在和不存在二吡啶胺的情况下培养了在NMOSD患者血清中刺激的中性粒细胞。结果，用二吡啶胺的治疗显示Sytox绿色阳性细胞显着降低，并抑制中性粒细胞弹性酶诱导。这些结果表明，NMOSD患者的血清具有诱导Netosis的能力，并且使用二吡啶氨基氨基甲醇可以进行药理学干预。

项目成果

好中球由来cell-free DNAが視神経脊髄炎におけるタイプ1インターフェロンを誘導する

中性粒细胞来源的游离 DNA 在视神经脊髓炎中诱导 1 型干扰素

• 发表时间: 2022
• 作者: Hisashi Murata;村田 尚
• 通讯作者: 村田 尚

Cell-free DNA profiling reveals neutrophils as type1 interferon driver in neuromyelitis optica

游离 DNA 分析揭示中性粒细胞是视神经脊髓炎中 1 型干扰素的驱动因素

• 发表时间: 2022
• 作者: Hisashi Murata