ポリコームの発生時期依存的な発現ダイナミクスと細胞分化ポテンシャルの関係性の解明

阐明多梳发育周期依赖性表达动态与细胞分化潜能之间的关系

• 批准号: 22K15118
• 负责人: 椙下 紘貴
• 金额: $ 3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15118/
• 关键词: ポリコーム; エピゲノム; 転写制御; ポリコーム群タンパク質; エピジェネティクス; 神経発生

細胞が特定の分化運命にコミットすると、それ以外の分化運命に関わる遺伝子群は発現抑制される。この分化遺伝子群の抑制において、ポリコーム群タンパク質（以下、ポリコーム）が中心的な役割を果たすことが知られている。ポリコームは基本的には複合体(ポリコーム複合体)を形成することで転写抑制に寄与する。ポリコーム複合体には様々な種類のバリアント（構成因子の異なるポリコーム複合体）が存在するが、構成因子の機能の違いについては必ずしも明らかになっていない。本年度は、ポリコーム複合体構成因子において神経幹細胞の分化能の転換過程で発現変動の大きい因子に関してChIP-Seqを行った。その結果共局在する領域だけではなく特定の因子に依存するような領域があることを発見した。また免疫染色をおこなったところ、同様の傾向が見られた。多重染色を行うためにラベル化抗体の作製やエピトープタグノックインマウスの作製も行いワークチェックを行なった。次年度ではこの作製した抗体やエピトープタグノックインマウスを用いて共局在性を検証し、それぞれの特異的因子による制御の詳細を明らかにしていく。また、ニューロンでは細胞分裂が起こらないので、遺伝子ノックアウトを行った際にタンパク質が完全に枯渇するまでに時間がかかってしまうのが問題となる。そのため、今年度にポリコームの制御を今後解析していくためプロテインノックダウンの実験系を導入し実験系がワークするのを確認した。

当细胞承担特定的分化命运时，其他参与分化命运的基因将被抑制。众所周知，聚癌基团蛋白（以下称为polycombs）在抑制这种分化基因组方面起着核心作用。 PolyComb基本上通过形成复合物（Polycomb复合物）来促进转录抑制。有多种类型的变体（具有不同构成因子的PolyComb复合物），但是构成因子功能的差异并不总是澄清。在今年，在更改Polycomb复合物组成因子中神经干细胞的分化潜力的过程中，表达差异很大的因素进行了CHIP-SEQ。结果，我们发现有些区域不仅取​​决于共定位区域，还取决于特定因素。免疫染色也显示出类似的趋势。为了进行多种染色，准备了标记的抗体，并准备了表位标签敲入小鼠，并进行了工作检查。在第二年，将使用产生的抗体和表位标签敲击小鼠进行共定位，并阐明每个特定因子对调节的细节。此外，由于神经元中不发生细胞分裂，因此在进行基因敲除时，蛋白质完全消耗的时间是一个问题。因此，为了分析今年的多肉液的控制，我们引入了实验蛋白敲低系统，并确认实验系统正在起作用。

项目成果

ポリコーム群タンパク質の発現ダイナミクスと発生における意義

多梳蛋白的表达动态及其在发育中的意义

• 发表时间: 2022
• 作者: 山田夏実;椙下紘貴;後藤由季子
• 通讯作者: 後藤由季子

Distinct subunit composition between Polycomb bodies within the nucleus of a neocortical neural stem-progenitor cell

新皮质神经干祖细胞核内多梳体之间不同的亚基组成

• 发表时间: 2023
• 作者: Natsumi Yamada;Kazunori Hojo;Hiroki Sugishita;and Yukiko Gotoh
• 通讯作者: and Yukiko Gotoh

A centrifugation-based method for high-throughput biomaterial separation using magnetic microbeads

一种基于离心的磁微珠高通量生物材料分离方法

• DOI: 10.1101/2023.04.26.538353
• 发表时间: 2023
• 期刊: bioRxiv
• 作者: Sugishita Hiroki;Hojo Kazunori;Hayashi Tetsutaro;Nikaido Itoshi;Gotoh Yukiko
• 通讯作者: Gotoh Yukiko