子宮頸部におけるHPV遺伝子型特異的細胞の同定による上皮内病変進展予測への応用

通过鉴定宫颈中 HPV 基因型特异性细胞来预测上皮内病变进展

基本信息

批准号：
21K17274
负责人：
岡山香里
金额：
$ 2.16万
依托单位：
Gunma Paz University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトパピローマウイルス (Human Papillomavirus; HPV) は、子宮頸部上皮内腫瘍やコイロサイトなどの形態学的変化を引き起こす。これらの細胞変化とHPV遺伝子型との関連性を明らかにするためには、単一細胞からHPV-DNAを検出する必要がある。私たちは子宮頸部標本の単一異型細胞からHPV-DNAを検出するため、manual microdissection (MMD) 法を開発した。さらにUniplex E6/E7 PCR法にて39種類のHPV遺伝子型を網羅的に解析した。私たちはこれらの手法を用い、コイロサイトの形成に16,18,52型が関与しないことに加え、多核細胞の形成に16, 34, 56型が関与することを証明した。2022度はMMD法によるHPV-DNA検出率向上のため詳細な手順の検討を行った。その結果、乾燥標本から採取する場合は顕微鏡下で簡単に単一細胞を可視化できDNA抽出液に容易に溶解したが、湿潤標本では可視化が困難でありDNA抽出液への溶解は前者に比較して困難であった。また、標的細胞が近接している場合はコンタミネーションを防ぐため湿潤標本が適していることが示唆された。加えて2022年度ではHPV感染細胞である二核細胞、異角化に着目してHPV遺伝子型を包括的に解析した。対象は液状検体細胞診（Liquid based cytology; LBC）で意義不明な異型扁平上皮細胞以上と判定された651症例である。LBC材料を用いてuniplex E6/E7 PCR法を実施し、HPV遺伝子型を同定した。また、パパニコロウ染色標本を作製して二核細胞、異角化を検出し、塗抹標本上の二核細胞をMMD法にて採取し、DNA抽出およびuniplex E6/E7 PCR法を行い、二核細胞のHPV遺伝子型を同定した。

人乳头瘤病毒（HPV）会引起形态学变化，例如上皮内肿瘤和肉骨细胞。为了阐明这些细胞变化与HPV基因型之间的关联，必须从单个细胞中检测到HPV-DNA。我们开发了一种手动显微解剖（MMD）方法，以检测宫颈标本中单身性细胞的HPV-DNA。此外，使用UniPlex E6/E7 PCR方法对39种HPV基因型进行了全面分析。使用这些技术，我们已经证明了类型16、18、52不参与肉骨细胞的形成，而这种类型的16、34、56参与了多核细胞的形成。在2022度中，检查了详细的程序，以使用MMD方法提高HPV-DNA的检测率。结果，当从干样品中收获时，单个细胞在显微镜下很容易可视化并很容易溶于DNA提取物，但是在湿标本中很难可视化，并且DNA提取物中的溶解比前者更困难。还建议湿标本适合在目标细胞近距离时防止污染。此外，在2022年，对HPV基因型进行了全面分析，重点介绍了HPV感染的细胞和分解的核细胞。受试者是651例非典型鳞状上皮细胞，或在液体标本细胞学（LBC）的重要性中更高。使用LBC材料鉴定HPV基因型进行单层E6/E7 PCR。此外，准备了帕帕内科洛染色样品以检测可见细胞和分解，并通过MMD方法，DNA提取和单流E6/E7 PCR收集涂片上的双核细胞，以鉴定核细胞的HPV基因型。