体外培養した骨髄由来免疫抑制細胞の局所炎症環境下における免疫抑制能の解析

局部炎症环境下体外培养的骨髓源性免疫抑制细胞的免疫抑制能力分析

基本信息

批准号：
21K16884
负责人：
藤本啓一
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、体外培養した骨髄由来免疫抑制細胞(Myeloid-derived suppressor cell, BM-MDSC)の免疫抑制効果を高リスク角膜移植マウスモデルで検証し、ヒト角膜移植における新規免疫寛容療法開発の基盤研究を実施する。C57/BL6Jマウスの骨髄細胞をインターロイキン(IL)-6、顆粒球単球コロニー刺激因子(GM-CSF)と共培養し、BM-MDSC(Gr1陽性CD11b陽性細胞)を誘導した。混合リンパ球反応(MLR)にBM-MDSCを付加し、T細胞増殖能を評価した。また、フローサイトメトリーで制御性T細胞の割合を測定した。MLR後のサイトカインの発現量(ELISA法)、誘導性一酸化窒素合成酵素(iNOS)の発現(リアルタイムPCR法)ならびに一酸化窒素(NO) の産生を測定した。令和4年度は、血管新生を誘導した高リスクマウス角膜移植モデルを作成し、結膜下注射によるBM-MDSCの移入ならびに角膜移植片の生存率、血管・リンパ管新生を評価した。IL-6とGM-CSFの共培養によりiNOSの発現が増加したBM-MDSCが誘導された。BM-MDSCのMLRへの付加により炎症性サイトカインの減少、抑制性サイトカインの増加、T細胞増殖の抑制、制御性T細胞の誘導を認めた。また、結膜下注射によるBM-MDSCの角膜移植片へ移行ならびに生存率の延長、血管新生ならびにリンパ管新生の抑制を認めた。BM-MDSCはiNOS経路を介して、T細胞増殖の抑制、制御性T細胞の誘導、血管・リンパ管新生の抑制によりマウス角膜移植片の拒絶反応を抑制した。本研究では、体外培養したBM-MDSCの免疫抑制効果を高リスクマウス角膜移植モデルで検証し、ヒト角膜移植における新規免疫寛容療法開発の基盤を構築した。

这项研究检查了体外培养的骨髓衍生的免疫抑制剂细胞（BM-MDSC）在高风险的角膜移植小鼠模型中的免疫抑制作用，并在人角膜移植中进行了新型免疫耐受疗法的基础研究。将来自C57/BL6J小鼠的骨髓细胞与白介素（IL）-6和粒细胞单核细胞落刺激因子（GM-CSF）共培养，以诱导BM-MDSC（GR1阳性CD11b阳性细胞）。将BM-MDSC添加到混合淋巴细胞反应（MLR）中，以评估T细胞增殖潜力。另外，通过流式细胞仪测量调节T细胞的比例。 MLR（ELISA方法），诱导型一氧化氮合酶（INOS）（实时PCR方法）的表达水平的表达水平以及一氧化氮（NO）的产生。在2022年，创建了一个高风险的小鼠角膜移植模型来诱导新血管形成，并通过亚结膜注射引入BM-MDSC，以及角膜移植物的存活率，并评估了血管和淋巴血管生成。 IL-6和GM-CSF的共培养诱导的BM-MDSC随着iNOS表达增加。在MLR中添加BM-MDSC显示炎症细胞因子的降低，抑制性细胞因子的增加，T细胞增殖的抑制作用以及调节性T细胞的诱导。此外，下结节注射显示BM-MDSC被转移到角膜移植物，长期存活率并抑制新血管形成和淋巴管生成。 BM-MDSC通过抑制T细胞增殖，调节性T细胞的诱导并抑制血管和淋巴管生成，通过iNOS途径抑制了小鼠角膜移植物的排斥。在这项研究中，在高风险的小鼠角膜移植模型中验证了体外培养的BM-MDSC的免疫抑制作用，并建立了在人角膜移植中开发新型免疫耐受疗法的基础。