体外培養した骨髄由来免疫抑制細胞の局所炎症環境下における免疫抑制能の解析

局部炎症环境下体外培养的骨髓源性免疫抑制细胞的免疫抑制能力分析

基本信息

批准号：
21K16884
负责人：
藤本啓一
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、体外培養した骨髄由来免疫抑制細胞(Myeloid-derived suppressor cell, BM-MDSC)の免疫抑制効果を高リスク角膜移植マウスモデルで検証し、ヒト角膜移植における新規免疫寛容療法開発の基盤研究を実施する。C57/BL6Jマウスの骨髄細胞をインターロイキン(IL)-6、顆粒球単球コロニー刺激因子(GM-CSF)と共培養し、BM-MDSC(Gr1陽性CD11b陽性細胞)を誘導した。混合リンパ球反応(MLR)にBM-MDSCを付加し、T細胞増殖能を評価した。また、フローサイトメトリーで制御性T細胞の割合を測定した。MLR後のサイトカインの発現量(ELISA法)、誘導性一酸化窒素合成酵素(iNOS)の発現(リアルタイムPCR法)ならびに一酸化窒素(NO) の産生を測定した。令和4年度は、血管新生を誘導した高リスクマウス角膜移植モデルを作成し、結膜下注射によるBM-MDSCの移入ならびに角膜移植片の生存率、血管・リンパ管新生を評価した。IL-6とGM-CSFの共培養によりiNOSの発現が増加したBM-MDSCが誘導された。BM-MDSCのMLRへの付加により炎症性サイトカインの減少、抑制性サイトカインの増加、T細胞増殖の抑制、制御性T細胞の誘導を認めた。また、結膜下注射によるBM-MDSCの角膜移植片へ移行ならびに生存率の延長、血管新生ならびにリンパ管新生の抑制を認めた。BM-MDSCはiNOS経路を介して、T細胞増殖の抑制、制御性T細胞の誘導、血管・リンパ管新生の抑制によりマウス角膜移植片の拒絶反応を抑制した。本研究では、体外培養したBM-MDSCの免疫抑制効果を高リスクマウス角膜移植モデルで検証し、ヒト角膜移植における新規免疫寛容療法開発の基盤を構築した。

这项研究是一种高风险的角膜移植，可验证髓样衍生的抑制细胞（BM-MDSC）的免疫抑制作用，它已用高风险的角膜移植小鼠模型在白化酸中培养，并发展了新的免疫原性治疗。角膜移植。 The bone marrow cells of the C57/BL6J mouse were cultured with interloy chin (IL) -6 (IL) -6 and granulocyte pharmacular colony stimuli (GM-CSF), and BM-MDSC (GR1-positive CD11B positive cell) was induced 。将BM-MDSC添加到混合淋巴细胞反应（MLR）中，以评估T细胞增殖能力。对照T细胞的比率通过流部位计量表测量。 MLR（ELISA方法）的细胞因子的表达量，诱导的一氧化氮合成酶的表达（INOS）（实际 - 时间PCR方法）和一氧化氮（NO）的产生。在第四会计年度中，创建了诱导新血管的高风险小鼠角膜移植模型，BM-MDSC的存活率以及结膜的亚脑注入和角膜移植的存活率以及结膜的核心移植率，以及评估血管和淋巴血管。 BM-MDSC诱导了IL-6和GM-CSF之间通过共培养来增加INOS的表达。通过将BM-MDSC添加到MLR，炎症细胞因子的还原，抑制细胞因子的增加，T细胞增殖的抑制以及对照T细胞的控制。另外，由于结膜亚连接的抑制在新血管中抑制了淋巴管，因此确认了由于结膜亚连接而向BM-MDSC角膜移植的过渡和扩展。 BM-MDSC通过抑制T细胞生长，诱导控制T细胞并抑制通过INOS途径抑制新的血管和淋巴管来抑制小鼠角膜移植的排斥。在这项研究中，通过高危小鼠角膜移植模型验证了在体外培养的BM-MDSC的免疫抑制作用，并建立了人角膜移植中新的免疫畸形治疗发展。