miRNA-146a-5pを用いた膀胱癌の新規診断・治療法の開発とその機能解析

miRNA-146a-5p膀胱癌诊疗新方法的开发及其功能分析

• 批准号: 21K16759
• 负责人: 薄場 渉
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16759/
• 关键词: 膀胱癌; miR-146a-5p; TET2; 診断マーカー; miRNA-146a-5p; エクソソーム; 膀胱腔内注入療法

再発・病期進展の可能性が高い筋層非浸潤性膀胱癌に対する低侵襲かつ高精度のバイオマーカーの発見、新たな膀胱内注入療法の確立を目的として、miR-146a-5pに関連する研究を行った。本年度はまず、昨年度miR-146a-5pの標的遺伝子として同定したTET2 について、3-UTRアッセイを用いてmiR-146a-5pがTET2を直接標的としていることを証明した。次に、エクソソーム内miR-146a-5pおよびTET2遺伝子のヒト臍帯血管内皮細胞（HUVEC）における影響を詳細に検討した。siRNAを用いてHUVECのTET2の発現をノックダウンしたところ、HUVECの増殖能が促進された。これはTET2がDNA脱メチル化の調節因子であり、その発現が悪性腫瘍における腫瘍抑制因子であるという報告を裏付ける結果であった。また、miR-146aを過剰発現させたJ82細胞のEVあるいは合成miR-146a をHUVECに添加し、mRNAおよび蛋白レベルの発現を解析したところ、どちらにおいてもmRNA 、蛋白共にTET2の発現が抑制されることが示された。さらにTET2の下流で働く因子について、マイクロアレイ解析の結果からターゲットをしぼり発現解析を行った結果、TET2 はc-mycを介して、膀胱癌の血管新生を促進していることが明らかになった。また、免疫組織化学染色にて膀胱癌における血管新生とTET2の局在を確認したところ、TET2と血管内皮マーカーであるCD31は同じ場所に局在が見られ、TET2発現が低下している標本ではCD31発現が亢進していた。

我们进行了与miR-146a-5p相关的研究，目的是发现非肌肉膀胱癌的微创和高度准确的生物标志物，这可能会导致疾病的复发和进展，并建立新的静脉输液输液疗法。今年，我们首先证明了MiR-146A-5P直接针对TET2的TET2，该TET2使用3-UTR测定法被确定为MiR-146a-5p的靶基因。接下来，详细研究了验证内miR-146a-5p和TET2基因对人脐带血管内皮细胞（HUVEC）的影响。当使用siRNA击倒TET2在HUVEC中的表达时，HUVEC的增殖能力得到了增强。这证实了TET2是DNA脱甲基化的调节剂，其表达是恶性肿瘤中的肿瘤抑制剂。此外，将过表达miR-146a的J82细胞的EV或合成miR-146a添加到HUVECs中以分析mRNA和蛋白质水平的表达，并且表明mRNA和蛋白质表达抑制了TET2表达。此外，微阵列分析表明，TET2通过C-MYC促进了膀胱癌的新血管化。此外，当我们使用免疫组织化学染色确认TET2在膀胱癌中的新血管形成和定位时，TET2和CD31（一种血管内皮标记物TET2和CD31）位于同一位置，CD31表达在标本中的表达增加，TET2表达降低。

项目成果

膀胱がんにおける尿中エクソソームの表面抗原CD55・CD9と内包物質miR-146a-5pのバイオマーカーとしての検討.

检查尿外泌体表面抗原 CD55/CD9 和内部物质 miR-146a-5p 作为膀胱癌的生物标志物。

• 发表时间: 2023
• 作者: 薄場渉;吉池美紀;荒武里衣;吉岡祐亮;山田龍治;早川望;落谷孝弘;菊地栄次.
• 通讯作者: 菊地栄次.

High‐grade bladder cancer cells secrete extracellular vesicles containing miRNA‐146a‐5p and promotes angiogenesis

• DOI: 10.1002/jex2.47
• 发表时间: 2022-08
• 期刊: Journal of Extracellular Biology
• 作者: Marta Prieto-Vila;W. Usuba;Y. Yoshioka;F. Takeshita;M. Yoshiike;Hideo Sasaki;Yusuke Yamamoto;E. Kikuchi;T. Ochiya

CD55 positive exosomes as a novel urinary biomarker for bladder cancer.

CD55 阳性外泌体作为膀胱癌的新型尿液生物标志物。

• 发表时间: 2022
• 作者: Hayakawa Nozomi;Yamada Ryuji;Aratake Satoe;Yoshiike Miki;Usuba Wataru;Yoshioka Yusuke;Ochiya Takahiro;Kikuchi Eiji.
• 通讯作者: Kikuchi Eiji.