脳動脈瘤病態を形作る慢性炎症環境の成立要件としての脳血管内皮細胞間バリア機能破綻

脑血管内皮细胞之间屏障功能的破坏是建立形成脑动脉瘤病理的慢性炎症环境的必要条件

基本信息

批准号：
21K16622
负责人：
栢原智道
金额：
$ 3万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究計画では、脳動脈瘤の各病態形成時期における血管内皮細胞間結合の形態学的あるいは機能的な変化、およびマクロファージの脳血管壁への浸潤様式について脳動脈瘤モデルラットを用いて検討する。そして、慢性炎症疾患としての脳動脈瘤においてどのように内皮細胞間バリアが破綻し炎症の場が形成されるのかを解明することを目的とする。令和4年度はPkd1欠損ラットの樹立困難等の前年度の結果を踏まえ、血管内皮細胞間結合と同様にマクロファージ浸潤の障壁となる内弾性板の断裂機構の解明に主眼を移した。前年度に確立した手法により脳動脈瘤モデルラットの脳血管の電子顕微鏡撮影用標本を作製し、脳動脈瘤病変部における内弾性板の微細構造につき走査型電子顕微鏡撮影により検証した。そして、内弾性板が断裂していない病態形成初期において、内弾性板の断裂に繋がると考えられる内弾性板、および周辺の血管壁構成細胞の局所的な形態学的変化を同定した。引き続き、血管壁構成細胞の内弾性板断裂への寄与に関して電子顕微鏡撮影を用いたさらに詳細な形態学的検証を、また内弾性板断裂への関与が示唆される酵素の発現状況や局在についての検証を進めていく。一方、脳動脈瘤破裂へのマクロファージの寄与を検証するため、マクロファージの遊走を抑制する遊走因子のドミナントネガティブ変異体を脳動脈瘤モデルラットの血液中に発現させる手法の確立を試みた。種々の手法につき検討したが、未だその確立には至っていない。

在本研究项目中，我们将利用脑动脉瘤模型大鼠，研究脑动脉瘤发病各个阶段的血管内皮细胞之间的连接以及巨噬细胞向脑血管壁的浸润模式的形态和功能变化。目的是阐明内皮细胞屏障如何破坏以及脑动脉瘤（一种慢性炎症性疾病）中如何形成炎症场。 2020财年，基于前一年的结果，包括建立Pkd1缺陷大鼠的困难，我们将重点转向阐明作为巨噬细胞浸润屏障的内弹性层的破裂机制，以及血管内皮细胞之间的连接。按照去年建立的方法制备脑动脉瘤模型大鼠脑血管电镜标本，利用扫描电镜观察脑动脉瘤病灶内弹力层的精细结构。我们还发现了内弹力层和周围血管壁细胞的局部形态变化，这些变化被认为是在发病早期（当内弹力层未撕裂时）导致内弹力层破裂的原因。随后，我们将使用电子显微镜进行更详细的形态学检查，了解血管壁组成细胞对内弹力层撕裂的贡献，以及与内弹力层撕裂有关的酶的表达状态和定位。继续进行验证。另一方面，为了验证巨噬细胞对脑动脉瘤破裂的贡献，我们尝试建立一种在脑动脉瘤模型大鼠的血液中表达抑制巨噬细胞迁移的迁移因子的显性失活突变体的方法。尽管考虑了各种方法，但尚未确立。