Investigation of NLRP3 inflammasome suppression and development of novel therapies in sepsis-induced immunoparalysis

NLRP3 炎症小体抑制的研究和脓毒症引起的免疫麻痹新疗法的开发

基本信息

批准号：
21K16590
负责人：
山賀聡之
金额：
$ 3万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16590/
关键词：
敗血症マクロファージ免疫麻痺 sepsis immunoparalysis NLRP3 inflammasome macrophage

项目摘要

本研究では、ヒト急性単球性白血病細胞株（THP-1）に由来するマクロファージ様細胞（THP-1マクロファージ）に対する、ダメージ関連分子パターン（DAMPs）への応答を調べることにより、敗血症患者血清に存在するノッド様受容体P3（NLRP3）インフラマソーム抑制を引き起こす生理活性物質を探索し、敗血症性免疫麻痺の病態解明を試みる。さらに、同定されたNLRP3インフラマソーム抑制に関わるタンパクまたはシグナルに対する阻害薬を用いることにより、免疫賦活効果を評価し敗血症の新規治療法の確立を目指す。本年度は、THP-1細胞のマクロファージへの分化を複数の条件下で確認し、マクロファージへの分化のマーカーを定量的RT-PCR法、ウエスタンブロッティング法により解析した。分化のマーカーとしてCD14、CD36、CD11bなどが有用であった。次に、敗血症患者血清下で免疫麻痺を生じたマクロファージと、マクロファージの分極におけるM2マクロファージ(抗炎症性)との類似性に着目し、まずTHP-1マクロファージの分極におけるマーカーを解析した。THP-1マクロファージをlipopolysaccharide(LPS)、IFN-γによりM1マクロファージ(炎症性)に、IL-4、IL-13によりM2マクロファージに分化させ、定量的RT-PCR法によりArginase、iNOs、MRC-1などのマーカーを評価した。今後、DAMPs刺激に対するNLRP3インフラマソーム抑制が確認されたTHP-1マクロファージにおける分極のマーカーを定量的RT-PCR法、ウエスタンブロッティング法により解析する。

在这项研究中，我们研究了源自人急性单核细胞白血病细胞系 (THP-1) 的巨噬细胞样细胞 (THP-1 巨噬细胞) 对脓毒症患者血清中损伤相关分子模式 (DAMP) 的反应。寻找抑制现有Nod样受体P3（NLRP3）炎性体的生物活性物质，并试图阐明脓毒症免疫麻痹的发病机制。此外，通过使用已识别的参与抑制 NLRP3 炎症小体的蛋白质或信号的抑制剂，我们的目标是评估免疫刺激效果并建立脓毒症的新治疗方法。今年，我们证实了THP-1细胞在多种条件下分化为巨噬细胞，并使用定量RT-PCR和Western blotting分析了巨噬细胞分化的标志物。 CD14、CD36、CD11b等可用作分化标志物。接下来，我们关注脓毒症患者血清下免疫麻痹的巨噬细胞与M2巨噬细胞（抗炎）在巨噬细胞极化方面的相似性，并首先分析了THP-1巨噬细胞极化的标志物。使用脂多糖 (LPS) 和 IFN-γ 将 THP-1 巨噬细胞分化为 M1 巨噬细胞（炎症），并使用 IL-4 和 IL-13 等标记物分化为 M2 巨噬细胞。将来，我们将使用定量 RT-PCR 和蛋白质印迹分析 THP-1 巨噬细胞中的极化标记，其中已证实响应 DAMP 刺激的 NLRP3 炎症小体抑制。