自己炎症性疾患PAC症候群におけるKIF7変異の炎症惹起メカニズムの解析

自身炎症性疾病PAC综合征中KIF7突变的炎症诱导机制分析

• 批准号: 21K16313
• 负责人: 日高 由紀子
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16313/
• 关键词: KIF7; Gli転写因子; hedgehog; 一次繊毛

本邦初のPAC症候群の症例でKIF7遺伝子異常を同定した。KIF7遺伝子変異によりKIF7の機能変化を細胞生物学的に解析行っている。KIF7は一次繊毛の形態および機能を掌り、ヘッジホッグシグナルの活性化を調整していると考えられている。その下流シグナルとして転写因子Gliが知られ、細胞質蛋白であるSuppressor of Fused(SuFu)と複合体を形成し活性化する。この活性化の過程において、SuFu-Gli複合体は速やかに一次繊毛における細胞内局在を変えることが報告されている（J　Cell Biol.2010;191:415-428）。PAC症例と健常者由来のiPS、あるいはKIF7-S456FとKIF7-wtを強発現させたヒト細胞株を用いて、hedgehog活性化誘導試薬による処理後、免疫蛍光染色によってGliの細胞内局在を観察することで、Gliの活性化を確認する。Gli転写活性の解析には、Gli転写因子認識配列をもつレポータープラスミド8×3'Gli-BS-delta51-LucⅡ、およびその変異プラスミド8×m3'Gli-BS-delta51-LucⅡを用いたアッセイを行う。この目的のため、hedgehog活性化誘導試薬が有効な細胞下部の選択をおこなっている。PAC症例と健常者由来のiPS細胞、あるいはKIF7-S456FとKIF7－ｗｔを共発現させたヒト細胞株をLPSなどリガンドで刺激し、インフラソームの活性化を誘導し、IL-1β濃度をELISAで測定する。また、他施設におけるKIF7変異マウスの解析研究機関との共同研究をセットアップした。

我们在PAC综合征的第一种情况下确定了日本的KIF7基因异常。 KIF7基因突变引起的KIF7功能变化的变化细胞生物学分析。据信KIF7可以调节原发性纤毛形态和功能，并调节刺猬信号的激活。转录因子GLI被称为其下游信号，并与融合（SUFU）的细胞质蛋白抑制剂形成复合物并激活它。在此激活过程中，据报道，Sufu-GLI复合物迅速改变了原发性纤毛中的亚细胞定位（J CellBiol。2010; 191：415-428）。通过观察GLI的激活通过观察GLI的亚细胞定位，通过使用刺猬激活治疗后，通过使用PAC病例和健康个体的IPS诱导试剂，或者强烈表达KIF7-S456F和KIF7-WT的人类细胞系，通过免疫荧光染色来诱导试剂。为了分析GLI转录活性，使用报告质粒8×3'gli-bs-delta51-lucⅱ进行测定，该质粒具有GLI转录因子识别序列，而突变质粒质粒8×M3'gli-BS-bs-delta51-lucⅱ。为此，刺猬活化诱导剂试剂用于选择有效的亚细胞区域。源自具有PAC病例的健康人的IPS细胞，或者用LPS（例如LP）（例如LPS）刺激了共表达KIF7-S456F和KIF7-WT的人类细胞系，以诱导通usplasome激活，并且通过ELISA测量IL-1β浓度。此外，我们成立了一个联合研究所，用于分析其他设施的KIF7突变小鼠。