Clarification of the pathological mechanism of POEMS syndrome using disease specific antibody

利用疾病特异性抗体阐明 POEMS 综合征的病理机制

基本信息

批准号：
21K16240
负责人：
栢森健介
金额：
$ 3万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はPOEMS症候群患者骨髄にごくわずかしか存在しない特徴的な形質細胞をシングルセルRNAシーケンス法により抽出し、変異解析や遺伝子発現解析を行った。そのデータからモノクローナル交代をコードする可変領域のcDNA配列を特定し、さらに同配列を抗体産生発現ベクターに組み込み、モノクローナル抗体生成技術を用いて人工的にM蛋白をクローニングすることに成功した。続いて、クローニングしたM蛋白に対して反応するタンパク質をプロテインアレイにより網羅的にスクリーニングしたところ、2人の異なる患者由来のモノクローナル抗体に反応する候補蛋白分子Aを同定した。今回、我々は候補蛋白分子Aと患者由来M蛋白が実際に結合しているのかを確認すべく間接ELISA法を行った。プレート上に抗原候補蛋白分子Aをコートし、クローニングしたモノクローナル抗体を反応させた。HRP標識二次抗体を用いて反応を確認したところ、強度は強くないものの反応を確認することができた。続いて抗原抗体反応がみられるかBiacoreを用いて確認を行った。リガンドとなる抗原候補蛋白Aをセンサーチップの金薄膜上に固定し、アナライトとして患者由来M蛋白をセンサーチップの表面に流しリガンドとアナライトが結合する反応をみたところ、こちらも強い反応とは言い難いものの波形から抗原抗体反応があるものと考えられた。最後に我々は、候補抗原蛋白分子Aが患者血清と直接的に反応するか間接ELISAにより確認を試みた。しかし、患者血清に含まれる種々のタンパク質や抗体との非特異的反応を抑えることが難しく、明瞭な結果を得ることができなかった。これまでの結果はPOEMS症候群の患者でみられるM蛋白が候補抗原蛋白分子Aと結合する可能性が高いことを示している。今後はPOMES患者において候補抗原蛋白分子Aがどのような働きを果たすのか、詳細な検討を行っていく。

我们提取了使用单细胞RNA测序的诗歌综合征患者的骨髓中极少数的特征性浆细胞，并进行了突变分析和基因表达分析。从数据中，确定了编码单克隆交替的可变区域的cDNA序列，并将相同的序列进一步掺入产生抗体的表达载体中，并使用单克隆抗体生产技术成功地将M蛋白成功克隆。随后，使用蛋白质阵列对对克隆M蛋白有反应的蛋白质进行了全面筛选，候选蛋白分子A A对来自两名不同患者的单克隆抗体有反应。在本文中，我们进行了一种间接的ELISA方法，以确认候选蛋白分子A和患者衍生的M蛋白是否真的结合。将板与抗原候选蛋白分子A涂在一起，并反应克隆的单克隆抗体。当使用HRP标记的二抗证实反应时，尽管有强度，但仍证实了反应。随后，使用biacore证实了是否观察到是否观察到抗原抗体反应。当我们观察到一种反应时，将配体抗原候选蛋白A固定在传感器芯片的金薄膜上时，将患者来源的M蛋白倒在传感器芯片表面上作为分析物，并结合了配体和分析物。尽管很难说这是一个强烈的反应，但人们认为由于波形而引起的抗原抗体反应。最后，我们试图确认候选抗原蛋白A分子是否通过间接ELISA直接与患者血清反应。但是，很难抑制患者血清中包含的各种蛋白质和抗体的非特异性反应，无法获得明确的结果。先前的结果表明，在诗歌综合征患者中看到的M蛋白可能与候选抗原蛋白分子A结合A。将来，我们将对候选抗原蛋白分子A将如何在POMES患者中进行详细检查。