FAM114A1の膜性腎症の病態形成機序における役割の解明

阐明FAM114A1在膜性肾病发病机制中的作用

• 批准号: 21K16198
• 负责人: 林 憲史
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kanazawa Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16198/
• 关键词: ポドサイト細胞骨格; 蛋白尿; FAM114A1; 膜性腎症; ポドサイト

ヒトおよびマウスの腎臓を使用した免疫染色でFAM114A1はポドサイト特異的に発現しており、特にポドサイトの一次突起と細胞体に局在することが示された。また、ヒト膜性腎症とラットハイマン腎炎（PHN）でFAM114A1の発現がタンパク質レベルが増加しているかを免疫染色および画像解析ソフトによる染色エリアで比較したところ、ヒト膜性腎症およびラットPHNモデルでは、FAM114A1の発現が増加していることがわかった。さらにヒト不死化ポドサイト培養細胞を用いた免疫染色で細胞内での局在を解析したところ、F-アクチンやパキシリンやタリンなどの接着分子と共局在を示し、FAM114A1はポドサイトで細胞骨格関連蛋白質として機能している可能性が示唆された。このためポドサイト細胞にsiRNAを導入してFAM114A1をノックダウンし機能解析を行ったところ、ポドサイトの細胞骨格の発達、ポドサイトの遊走、細胞の接着が阻害された。最後に、相互作用タンパク質を検出するために、FAM114A1-3XFLAGタンパク質とヒト糸球体抽出物を用いてアフィニティープルダウンアッセイを実施したところ、関連候補蛋白質としてCytoskeleton associated protein4(CKAP4)やTalin1などの細胞骨格関連蛋白質と相互作用している可能性が示唆された。結論として、FAM114A1はポドサイトの細胞骨格に関連するタンパクであることが明らかになった。FAM114A1-global ノックアウトマウス(FAM114A1-KO)を作成、繁殖に着手しているが、FAM114A1-KOは致死的ではなく40週齢を超えて生存可能であり、さらに繁殖可能であることがわかった。

使用人和小鼠肾脏进行免疫染色，表明FAM114A1是特异性表达的，并且特别局限于足细胞的主要过程和细胞体。此外，当使用免疫染色和图像分析软件比较人膜肾病和大鼠海曼肾炎（PHN）中FAM114A1表达的蛋白质水平时，发现FAM114A1表达在人类膜肾病和大鼠PHN模型中的表达增加。此外，通过使用人生的足细胞培养的细胞进行免疫染色来分析细胞内的定位，并显示与诸如F-肌动蛋白，帕克西蛋白和塔林等粘附分子共定位，这表明FAM114A1可能起作用，表明FAM114A1可能起到了podococytes的细胞骨架相关蛋白的作用。因此，将siRNA引入足细胞中以击倒FAM114A1，并进行功能分析，并抑制了足细胞的细胞骨架，足细胞的迁移和细胞粘附。最后，为了检测相互作用的蛋白质，使用FAM114A1-3XFLAG蛋白和人肾小球提取物进行亲和力下拉测定法，这表明它可能与细胞骨架相关蛋白（如细胞骨架相关蛋白（CKAP4）（CKAP4）（CKAP4）和talin1作为相关候选候选蛋白相互作用。总之，据揭示了FAM114A1是与足细胞细胞骨架有关的蛋白质。 FAM114A1-Global敲除小鼠（FAM114A1-KO）已被创建并开始繁殖，但是FAM114A1-KO并非致命，可以生存40周龄，并且进一步繁殖。