膵がんオルガノイドモデルを用いた腫瘍溶解性ヘルペスウイルスベクターの開発

使用胰腺癌类器官模型开发溶瘤疱疹病毒载体

• 批准号: 21K15986
• 负责人: 黒田 誠司
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15986/
• 关键词: 腫瘍溶解性ヘルペスウイルス; 膵がんオルガノイドモデル

本研究では、新たながん治療モダリティとして注目される腫瘍溶解性ヘルペスウイルス（oHSV）をベースに、膵癌治療に特化した新規oHSVの開発を行う。本目標達成のためにヒト膵がん患者由来サンプルより樹立したヒト膵がんオルガノイドモデルを利用し、実際にヒト膵がんに高い感染・複製能力を示す治療効果の高い新規oHSVの開発・特性解析を行う。前年度までに我々はoHSVに対してBacterial artificial Chromosome（BAC）を挿入したoHSV-BACを構築し、その構造解析・機能解析からoHSV-BACは元のoHSVの構造を保ちつつ、大腸菌内での遺伝子操作が可能であることを確認した。本年度は、樹立したoHSV-BACの複数のクローンについて全シークエンス解析を実施した。その結果、配列レベルでoHSV-BACは大腸菌内でもoHSVの遺伝情報を忠実に保っていることが明らかとなった。現在、作製したoHSV-BACを用いて新規oHSV作製のための遺伝子改変を進めている。一方、樹立した膵がんオルガノイドモデルについて特性解析を進め、由来となる腫瘍の性質が保持されていることを確認した。加えてヒト膵がん３次元培養モデルとして、新たにヒト膵がんスフェロイドモデル、浮遊培養モデルを構築した。実験系に応じてこれらを併用する。作製したヒト膵がん３次元培養モデルに対するoHSVの感染能力及び殺傷性を評価するために、ヒト膵がん２次元培養あるいはスフェロイド３次元培養モデルに対して感染試験を行った。その結果、oHSVは２次元培養においては膵がん細胞に効率的に感染し殺傷する一方、３次元培養モデルでは感染性・殺傷性ともに２次元培養と比較して効率が大幅に落ちることが判明した。引き続き、oHSVの３次元培養モデルにおける特性を解析するとともに、BAC化されたoHSV-BACの遺伝子改変を進めていく。

在这项研究中，我们将基于溶瘤疱疹病毒（oHSV）开发一种专门用于胰腺癌治疗的新型oHSV，该病毒作为一种新的癌症治疗方式而备受关注。为了实现这一目标，我们将利用从人类胰腺癌患者来源的样本建立的人类胰腺癌类器官模型来开发和开发一种具有高治疗功效的新型oHSV，该病毒实际上在人类胰腺癌中表现出高感染和复制能力。 。去年，我们通过将细菌人工染色体（BAC）插入到oHSV中构建了oHSV-BAC，并且根据其结构和功能分析，oHSV-BAC保持了原始oHSV结构，可以在大肠杆菌中使用。证实基因操纵是可能的。今年，我们对多个已建立的 oHSV-BAC 克隆进行了全序列分析。结果表明，即使在大肠杆菌内，oHSV-BAC 在序列水平上也忠实地保留了 oHSV 遗传信息。目前，我们正在利用创建的oHSV-BAC进行基因改造以创建新的oHSV。同时，我们继续对已建立的胰腺癌类器官模型进行表征，并确认其保留了其来源肿瘤的特征。此外，我们构建了新的人胰腺癌球体模型和漂浮培养模型作为三维人胰腺癌培养模型。根据实验系统组合使用它们。为了评价oHSV对制备的人胰腺癌3D培养模型的感染性和杀伤能力，对人胰腺癌2D培养物或球体3D培养模型进行感染试验。结果显示，虽然 oHSV 在二维培养中能够有效感染并杀死胰腺癌细胞，但在三维培养模型中，感染力和杀伤效率均显着低于二维培养。接下来，我们将在三维培养模型中分析oHSV的特征，并对oHSV-BAC进行基因改造。

项目成果

高品質遺伝子治療用無毒化ヘルペスウイルス(HSV)ベクターの精製方法および保管条件の検討

用于基因治疗的高质量解毒疱疹病毒（HSV）载体的纯化方法和储存条件的检查

• 发表时间: 2021
• 作者: 黒田 誠司;宮川 世志幸;助川 誠;酒井 真志人
• 通讯作者: 酒井 真志人

Evaluation of purification and storage conditions for herpes simplex virus-based vectors

单纯疱疹病毒载体纯化和储存条件的评估

• 发表时间: 2021
• 作者: Seiji Kuroda;Yoshitaka Miyagawa;Makoto Sukegawa;Motoko Yamamoto;Kumi Adachi;William F. Goins;Justus B. Cohen;Joseph C. Glorioso;and Takashi Okada
• 通讯作者: and Takashi Okada