炎症性腸疾患関連大腸癌の免疫微小環境に影響を与える重要因子の検索

寻找影响炎症性肠病相关结直肠癌免疫微环境的重要因素

• 批准号: 21K15971
• 负责人: 石川 恵里
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15971/
• 关键词: 炎症性腸疾患関連腫瘍; 潰瘍性大腸炎; 炎症性腸疾患関連大腸癌; Epstein-Barr virus

炎症性腸疾患関連大腸腫瘍における腫瘍微小環境の特殊性を明らかにするために腫瘍細胞と免疫細胞のEpstein-Barr virus（EBV）の発現をEBER in situ hybridizationにより評価した。まずは一部の症例でEBVの評価を行ったが、腫瘍細胞・免疫細胞ともにEBV発現が同定できた症例は1例も認められなかった。そのためそれ以上のさらなる追加症例における検索は断念した。そのほかに微小環境に影響を及ぼす因子として細胞障害性T細胞、マクロファージ、制御性T細胞の浸潤を、それぞれ抗CD8抗体（clone C8/144B）、抗CD163抗体（clone 10D6）、抗FoxP3抗体（clone 236A/E7）を用いて免疫組織化学染色により評価した。免疫染色結果を定量化する様々な方法を模索し、最終的に再現性、客観性の高かった画像解析ソフトHALOをバーチャルスライドシステムと組み合わせて用いることとした。腫瘍内領域と腫瘍辺縁領域の陽性細胞数をそれぞれカウントした。陽性細胞数が多い部分を0.5mm2×10カ所ずつ抽出し、1mm2あたりの陽性細胞数を算出し比較した。Preliminaryな解析では、腫瘍内領域、腫瘍辺縁領域のCD8陽性T細胞はいずれもLGD/HGD/Tis、T1、T2-4と深達度の進行に伴い増加傾向であった。マクロファージ、制御性T細胞についても引き続き解析を進めており、臨床因子とのさらなる関連を解析している。

为了阐明炎症性肠病相关结直肠肿瘤肿瘤微环境的独特性，我们通过EBER原位杂交评估了Epstein-Barr病毒（EBV）在肿瘤细胞和免疫细胞中的表达。首先，我们在某些情况下评估了 EBV，但在任何情况下我们都无法识别肿瘤细胞或免疫细胞中的 EBV 表达。因此，我们放弃寻找进一步的病例。影响微环境的其他因素包括使用抗 CD8 抗体（克隆 C8/144B）、抗 CD163 抗体（克隆 10D6）和抗 FoxP3 抗体（克隆 236A/E7）渗透细胞毒性 T 细胞、巨噬细胞和调节性 T 细胞)用于通过免疫组织化学染色进行评价。我们探索了多种方法来量化免疫染色结果，最终决定使用具有高重现性和客观性的图像分析软件HALO，结合虚拟载玻片系统。分别计数瘤内区和瘤边缘区阳性细胞数。在0.5mm2×10个区域中提取阳性细胞较多的区域，计算并比较每1mm2的阳性细胞数。初步分析显示，随着浸润深度进展至LGD/HGD/Tis、T1、T2-4，瘤内区和肿瘤边缘区CD8阳性T细胞数量增多。我们还在继续分析巨噬细胞和调节性T细胞，并进一步分析它们与临床因素的关系。