アンジェルマン症候群 のUBE3Aアンチセンス転写抑制による新規遺伝子治療の開発

通过 UBE3A 反义转录抑制开发治疗 Angelman 综合征的新型基因疗法

• 批准号: 21K15913
• 负责人: 三浦 茜
• 金额: $ 3万
• 依托单位: National Center for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2027-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15913/
• 关键词: 遺伝子治療; アンジェルマン症候群; UBE3A-ATS転写抑制; CRISPR/dCas9; AAV5; 神経疾患; 先天性疾患; AAV

アンジェルマン症候群はUbe3a遺伝子の欠失や変異による機能障害から引き起こされる。本研究では、dCas9-KREB-MeCPsによるUBE3A-ATS領域の転写調節技術によって、SNRPN領域のプロモーターで始まる伸長反応を抑制することで、Ube3a遺伝子発現回復を試みる。本年は、2022年6月1日から2023年4月10日まで、産前産後休暇と育児休業を取得していたため、休業期間は研究を中断していた。育児休業が終わり、研究が再開してから、細胞培養と遺伝子導入の実験準備を進めている。今後は、SH-SY5Y株にdCas9-KRAB-MeCP2ベクターとgRNA発現ベクターをエレクトロポレーション法により遺伝子導入を行い、UBE3A-ATS発現低下レベルにより、遺伝子治療に最適なgRNAを選択する。さらに、dCas9-KRAB-MeCP2ベクターと最適なgRNAベクターの配列を搭載した、AAV5ウイルスベクターの作製を行う予定である。

Angelman综合征是由于Ube3a基因缺失或突变导致的功能障碍引起的。在本研究中，我们尝试使用 dCas9-KREB-MeCPs 的 UBE3A-ATS 区域转录调控技术，通过抑制 SNRPN 区域启动子处启动的延伸反应来恢复 Ube3a 基因表达。今年，我从2022年6月1日到2023年4月10日休产前产后假和育儿假，所以在休假期间我暂停了我的研究。育儿假结束重新开始研究后，她一直在准备细胞培养和基因转移实验。未来，我们将通过电穿孔将dCas9-KRAB-MeCP2载体和gRNA表达载体导入SH-SY5Y菌株中，并根据UBE3A-ATS表达降低的水平选择最佳的gRNA进行基因治疗。此外，我们计划创建一个携带 dCas9-KRAB-MeCP2 载体和最佳 gRNA 载体序列的 AAV5 病毒载体。