アルツハイマー病のタウ病理形成におけるオートファジー関連蛋白ATG9Aの役割

自噬相关蛋白 ATG9A 在阿尔茨海默病 tau 病理学中的作用

基本信息

批准号：
21K15675
负责人：
笠原浩生
金额：
$ 3万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15675/
关键词：
アルツハイマー病タウオートファジー ATG9A 変性神経突起

项目摘要

アルツハイマー病（AD）のタウ病理形成におけるATG9Aの関与について解明することを目的として研究を行った。令和3年度には神経変性疾患の各種病理マーカーにおけるATG9Aの局在を免疫組織学的に検討し、神経変性疾患で生じる各種病理マーカーのうち、ADの変性神経突起にのみATG9Aが局在することを確認した。さらに、タウ遺伝子を導入した培養細胞モデルを用いて、siRNAによってATG9Aの発現を抑制した状態でのタウ蛋白発現を、ウエスタンブロッティングによって検討したところ、ATG9AのsiRNAを導入した培養細胞のRIPA可溶性画分は、対照のsiRNAを導入した培養細胞に比べてタウ蛋白の発現が低下していることを確認した。以上の結果から、オートファジーの異常でタウ蛋白の発現に変化が生じる可能性があり、タウ病理形成においてATG9Aが関与していることが示唆されると考えられた。令和4年度には、ATG9AのsiRNAを導入した培養細胞のRIPA不溶性画分についてもRIPA可溶性画分と同様の検討を行った。ATG9AのsiRNAを導入した培養細胞のRIPA不溶性画分は、対照のsiRNAを導入した培養細胞に比べてタウ蛋白の発現が低下している傾向を認めたが、複数回の検討を行ったところ、統計学的に有意な結果は得られなかった。RIPA不溶分画の可溶化のために種々のバッファーを用いた検討を行っているが、今後はsiRNAのノックダウン効率を上げる方法の検討や、蛋白抽出の最適条件についても検討を行っていく予定である。

我们进行了一项研究来阐明 ATG9A 在阿尔茨海默病 (AD) 中 tau 病理形成的参与。在2021财年，我们通过免疫组织学研究了ATG9A在神经退行性疾病的各种病理标志物中的定位，结果发现，在神经退行性疾病中出现的各种病理标志物中，ATG9A仅定位于AD的退变神经突中。此外，使用已导入tau基因的培养细胞模型，通过蛋白质印迹法检查tau蛋白表达，同时通过siRNA抑制ATG9A表达，证实与导入对照siRNA的培养细胞相比，tau蛋白表达降低。上述结果提示自噬异常可能引起tau蛋白表达的变化，ATG9A参与tau发病机制。 2020年度，我们对导入了ATG9A siRNA的培养细胞的RIPA不溶部分作为RIPA可溶部分进行了相同的研究。我们发现引入ATG9A siRNA的培养细胞的RIPA不溶部分中tau蛋白的表达往往低于引入对照siRNA的培养细胞，但经过多次研究，没有获得统计学上显着的结果。我们目前正在研究使用各种缓冲液来溶解 RIPA 不溶部分，未来我们计划研究提高 siRNA 敲低效率的方法以及蛋白质提取的最佳条件。