The interaction between NK cells and neutrophil extracellular traps in antitumor immunity

NK细胞与中性粒细胞胞外陷阱在抗肿瘤免疫中的相互作用

• 批准号: 21K15651
• 负责人: 土井 俊文
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15651/
• 关键词: 好中球細胞外トラップ; NK細胞; 腫瘍免疫学

前年度はヒト白血病細胞株HL-60をAtRA (All-trans retinoic acid)で分化誘導した好中球様細胞株や、健常人ボランティアから採取した末梢血好中球(peripheral blood neutrophil: PBN)にPMA(phorbol myristate acetate)刺激を行い、好中球細胞外トラップ(neutrophil extracellular traps: NETs)の安定した生成が可能となった。当該年度は主に、NK細胞機能の評価を行った。NK細胞株KHYG1や、末梢血単核球(Peripheral Blood Mononuclear Cells: PBMC)を用い、パーフォリン・グランザイム・DNAM1・TIGITなどの活性化マーカー測定や、標的細胞としてK562細胞株を使用し細胞傷害活性の確認を行った。また、動物モデルも同時に進めており、C57BL/6マウスの足底に悪性黒色腫細胞株（B16BL6）を移植した後に、下肢を切断することで肺への自然転移を起こるモデルを使用している。自然転移に対するNETsの関連を検討するため、NETs形成を阻害するDNAseⅠ・クロロキンを投与し、肺でのNETs形成の差異や、肺転移個数の変化を検討している。また、膵癌細胞株（Pan02）の膵臓への同所移植による肝転移モデルも作成し、同様のNETs阻害実験を開始している。

在上一年中，诱导人类白血病细胞系HL-60与ATRA（全反式视黄酸）和外周血中性粒细胞（PBN）分化的中性粒细胞样细胞系被刺激以刺激从健康志愿者那里收集的稳定中性粒细胞外胞外陷阱（网络）。在这一年中，主要评估了NK细胞功能。使用NK细胞系KHYG1和外周血单核细胞（PBMC）测量了诸如Perforin，Granzyme，Dnam1和Tigit之类的激活标记，并使用K562细胞系作为靶细胞确认细胞毒性活性。我们还同时研究动物模型，我们正在使用一种模型，其中将下肢截肢后，将恶性黑色素瘤细胞系（B16BL6）移植到C57BL/6小鼠的足底鞋底，然后自发转移到肺部。为了调查净纳aseI和氯喹的净结合，抑制了净形成网络，并研究了肺部净形成的差异以及肺转移数量的变化。我们还通过将胰腺癌细胞系（PAN02）的原位移植到胰腺中创建了肝转移模型，并开始进行类似的网络抑制实验。