肺ウイルス感染による宿主免疫応答に対するPI3キナーゼδ阻害剤の効果の解明

阐明PI3激酶δ抑制剂对肺部病毒感染诱导的宿主免疫反应的影响

基本信息

批准号：
21K15471
负责人：
神尾敬子
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

患者より採取した気道上皮細胞を用いて、PI3Kδ阻害剤がヒトメタニューモウイルス感染時に共抑制分子PD-L1の発現増強を抑制し、一方で自然免疫である抗ウイルスインターフェロンの産生を増強を介して、PD-L2の発現をさらに増強することを示した。ウイルス特異的細胞障害性T細胞の活性化を抑制することで感染の遷延化に関わるPD-L1とは異なり、PD-L2はCD4陽性T細胞を活性化させ、PD-L1/PD-1結合を抑制することで病原体の排除を促進するとの報告がある。すなわち気道ウイルス感染時に、PI3Kδを介した自然免疫と獲得免疫のクロストークがあり、PI3Kδ阻害剤は自然免疫・獲得免疫両面からウイルスの排除に対し促進的に作用する可能性があることを報告した（Ogawa T et al. Front Immunol. 2021 Nov 25;12:767666.)。本年度はex vitroで示したPI3Kδ阻害剤の抗ウイルス効果・抗炎症効果を、マウス感染モデルで解明する目的に、PCLS (precision-cut lung slices)という技術を用いてマウス肺 ex vivo培養系のmethodを確立した。具体的には、振動刃ミクロトームを用いてマウス肺を損傷することなく200-500ミクロンの切片に切り出し、気道上皮細胞、平滑筋細胞、免疫担当細胞や神経細胞などの多種多様な細胞と、細胞外基質からなる3次元肺微小環境を実験的に再現し、長期培養する技術を確立した。また長期培養後のPCLSからのRNA抽出による遺伝子発現評価が可能であり、PCLSヘヒトメタニューモウイルスを感染後の経時的なウイルス増殖能と、抗ウイルスインターフェロンや炎症性サイトカイン・ケモカインなどの免疫応答誘導を確認した。

使用从患者收集的气道上皮细胞，我们表明PI3Kδ抑制剂在感染人类元瘤病毒后抑制了共抑制性分子PD-L1的表达增强，而通过增强的抗病毒毒素的产生增强了PD-L2的表达。与PD-L1通过抑制病毒特异性细胞毒性T细胞的激活参与长期感染的PD-L1不同，据报道，PD-L2激活CD4阳性T细胞并抑制PD-L1/PD-1结合，从而促进病原体消除。换句话说，在呼吸道病毒感染期间，PI3Kδ介导的先天和获得的免疫力之间存在串扰，而PI3Kδ抑制剂可能会促进从先天和获得的免疫中消除病毒（Ogawa T等人（Ogawa T等人）（Ogawa tef。25; 2021 Nov25; 2021 Nov; 12：12：76766666666666.）。）。在今年，我们使用一种称为PCLS（精确切割肺切片）的技术建立了一种用于小鼠肺的离体培养方法，目的是阐明小鼠感染模型中Ex Velro中PI3KΔ抑制剂的抗病毒和抗炎作用。具体而言，建立了一种使用振动叶片微型型的技术，将小鼠肺切成200-500微米的切片，而不会损害小鼠肺，从而实验重现了由各种细胞组成的三维肺微环境，包括各种各样的细胞，包括各种各样的细胞，包括气道上皮细胞，平滑肌细胞和neurons和Neurons和Neurons and Newrique and Fender newrence and Forness，并创建了一个培养。此外，可以通过长期培养后从PCL中提取RNA来评估基因表达，并确认用PCLS Hehuman hehuman obsapneumoveluls感染后随时间推移病毒增殖能力，并诱导了抗病毒干扰素，炎症细胞因子和趋化因子等免疫反应。