Analysis of a novel mechanism of nuclear localization for arthropod-borne Orthobunyavirus nucleoprotein

节肢动物传播的正布尼亚病毒核蛋白核定位新机制的分析

基本信息

批准号：
21K14981
负责人：
河原円香
金额：
$ 2.08万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

節足動物媒介性の人獣共通感染症ウイルスであるオルソブニヤウイルスの一種オロプーシュウイルス(OROV) は中南米でデング熱に次いで頻発する新興感染症であるが、病原性発現機構や作用機序に関する研究は十分ではない。一方申請者はOROVが既存の感染機構では報告されていない「核蛋白質(N)が感染細胞の核に集まる」様子を観察した。感染細胞で産生される主要な蛋白質であり、ウイルス感染に必要不可欠であるNの細胞内挙動を明らかにすることは、未だ病原性メカニズムが明らかではないOROVの新たな感染機構の解明につながると考えた。そこで本研究では「OROVのNが感染細胞の核に局在する」という新たな現象の解明を目的とした。本年度は感染細胞を用いて経時的なNの局在の変動について詳細な解析を行った。感染細胞の核・細胞質を分画し、それぞれの画分におけるNの存在量を経時的に測定した結果、各種感染細胞においてNの存在量および集積時間に差があることが明らかとなった。またOROV以外のオルソブニヤウイルスとしてOROVと同じ血清群のサシュペリウイルス、異なる血清群のブニヤムウェラウイルスを用いて免疫染色により細胞内のNの局在を観察したところ、これらのウイルスにおいてもNが核に局在することを確認した。ただ一方でブニヤムウェラウイルスの核小体シグナル予測のスコアはOROVと比較して低く、また感染時にNが核に局在する時間が異なる結果を得た。現在この差異についての解析を行っている。

Oropush病毒（OROV），一种类型的矫形病毒，一种节肢动物传播的人畜共患病，是一种新兴的传染病，是登革热后拉丁美洲下一个最常见的传染病，但是对致病性发展和作用机制的研究不足。同时，申请人观察到OROV“传播核蛋白（N）聚集在感染细胞的核中”，现有感染机制尚未报告。我们认为，阐明N的细胞内行为，N（一种在感染细胞中产生的主要蛋白质，对于病毒感染所必需的）将导致阐明一种新的OROV感染机制，在该机制中，病原机制仍然未知。因此，这项研究旨在阐明“ OROV中的n位于感染细胞核”的新现象。今年，我们对使用感染的细胞进行了详细的分析，对随着时间的推移的定位变化。将感染细胞的细胞核和细胞质分离，并随着时间的推移测量每个馏分中N的丰度，并且揭示了各种感染细胞中N的丰度和积累时间存在差异。此外，当通过使用与OROV和OROV的OROV和Bunyamwella病毒相同的血清群中的Supérivirus进行免疫染色来观察N细胞中N的定位时，已确认N在这些病毒中也将N定位于核。然而，与OROV相比，Bunyamwella病毒的核酚信号预测评分较低，并且在感染时n位于核的核心时获得了不同的结果。我们目前正在对此差异进行分析。