環境水を用いた非侵襲的な魚病検査手法の確立

利用环境水体进行非侵入性鱼病检测方法的建立

• 批准号: 21K14901
• 负责人: 竹内 久登
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K14901/
• 关键词: 養殖; 魚病; 感染症対策; マダイ; エドワジエラ症; 非侵襲検査; RNA

昨今、養殖場では様々な魚病が頻発し、生産効率や商品価値を著しく低下させている。魚病被害抑制のためには、密な検査により魚病発生を早期に探知し、発生拡大の前に封じ込め・治療を行うことが不可欠であるが、現行の検査方法は取り上げや解剖による魚体へのダメージから養殖業者に敬遠されている。そこで本研究では環境水をサンプルとした、魚体の取り上げを必要としない非侵襲的な魚病検査手法を確立することを目的とする。昨年度、マダイに対する魚病細菌Edwardsiella anguillarumの感染試験を行い、飼育水中のマダイ由来RNAの網羅的検出を行ったところ、複数のRNAが非感染魚飼育水に比べ有意に増加していた。また、これらのうち3つのRNAを選定し定量PCR法による定量検出系を確立し、飼育水中の当該RNAの発現動態を調べたところ、対象としたいずれのRNAも感染魚飼育水中で非感染魚飼育水に比べ数十～数百倍高く発現しており、またRNAの種類により発現パターンが異なっていた。そこで本年度は、再度マダイに対するE.anguillarumの感染試験を行い、確立した飼育水中のRNA定量系について再現性・妥当性を確認したところ、確立した3つのRNAはいずれも昨年度と同様の発現動態を示し、再現性が確認された。また、これらのRNAは実際の養殖場の飼育水からも検出可能であったことから、これらが病原体の感染を探知できる非侵襲性マーカーとして魚病検査に応用できる可能性が示唆された。さらに、選定されたRNAの一部については、市販の検査キットを用いた関連タンパク質の飼育水中の活性測定系を確立した。

最近，在水产养殖场经常发生各种鱼类疾病，从而大大降低了生产效率和产品价值。为了控制鱼类疾病的损害，必须通过仔细检查早早检测鱼类疾病暴发，并在爆发爆发之前遏制和治疗它们，但是由于解剖和解剖引起的解剖和解剖，水产养殖公司避开了当前的测试方法。因此，本研究旨在建立一种非侵入性鱼类疾病测试方法，该方法不需要使用环境水作为样本去除鱼体。去年，我们针对红海的鱼类疾病细菌进行了一项感染测试，并针对红海的泡沫进行了感染测试，并在饲养的水中全面检测到了红海的RNA，并发现与未感染的鱼类饲养的水相比，多个RNA显着增加。此外，选择了其中三个RNA，并使用定量PCR方法建立了定量检测系统，并检查了饲养水中RNA的表达动力学。靶向鱼中的所有RNA均表达了几十至数百倍的速度，比未感染的鱼类饲养的水高几十到数百倍，并且表达模式因RNA的类型而不同。因此，今年，我们在红海出河上进行了另一项针对Anguillarum大肠杆菌的感染测试，并确认了在饲养水中已建立的RNA定量系统的可重复性和有效性。这三个已建立的RNA均表达与去年相似的表达动力学，证实了可重复性。此外，由于可以在实际的农用农用水中检测到这些RNA，因此建议它们可以作为可以检测病原体感染的非侵入性标记物进行鱼类疾病测试。此外，对于某些选定的RNA，建立了使用市售测试套件来测量饲养水中相关蛋白活性的系统。

项目成果

感染死亡魚を介したマダイエドワジエラ症の蔓延に関する研究

红鲷爱德华氏菌病通过受感染死鱼传播的研究

• 发表时间: 2023
• 作者: 岸正敏;小松一弘;土屋健司;竹内久登・原川翔伍・ 清水園子・川上秀昌
• 通讯作者: 竹内久登・原川翔伍・ 清水園子・川上秀昌

エドワジエラ菌感染により発現変化するマダイ飼育水中環境RNAの探索

探讨因爱德华氏菌感染而引起表达变化的红鲷水生环境RNA

• 发表时间: 2022
• 作者: 岸正敏;小松一弘;土屋健司;竹内久登・原川翔伍・ 清水園子・川上秀昌;竹内久登 ・山中裕樹・釣健司・ 原川翔伍・川上秀昌・清水園子
• 通讯作者: 竹内久登 ・山中裕樹・釣健司・ 原川翔伍・川上秀昌・清水園子