緑茶カテキン類による細胞融合と破骨細胞分化制御機構の解明

阐明绿茶儿茶素对细胞融合和破骨细胞分化的控制机制

• 批准号: 21K14815
• 负责人: 栗谷 健志
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K14815/
• 关键词: EGCg; 細胞融合; 破骨細胞; カテキン類; RAW264.7; カテキン; 多核化

本年度はエピガロカテキンガレート(EGCg)による細胞融合に関わる因子を特定することを目指し，遺伝子発現解析および細胞の融合，機能に焦点を当てて実験を行った。破骨前駆細胞であるRAW264.7細胞にEGCgを添加し，多核化が亢進した細胞群における遺伝子発現を解析した。比較対象として薬剤未処理群あるいは破骨細胞への分化誘導を行ったRANKL/M-CSF添加群を用いた。細胞を培養用プレートに播種しα-MEM培地中で3日間培養後，RNAを抽出し遺伝子発現解析に供した。細胞融合についてはギムザ染色，蛍光顕微鏡下での核やアクチンリングの可視化を行い評価した。破骨細胞分化についてはTRAP染色，TRAP活性測定を行い評価した。マイクロアレイによる解析，およびリアルタイムPCRにより遺伝子発現の定量を行った結果，未処理群と比較しEGCg添加群は刺激・ストレス応答関連因子の発現上昇が認められた。実施計画ではタンパク質レベルでの評価を中心に行う予定であったが，細胞レベルでの応答や細胞の形態の評価の重要性が増した。一連の解析から選別した候補因子について細胞の多核化・融合に対する影響の検討を行い，細胞融合に関与しているかどうかを評価した。また，外的環境条件の違いによる細胞融合への影響の比較，それらの応答が破骨細胞分化とは異なる経路で起こっているかどうかを検討した。本研究の目的であるEGCg添加による細胞融合に関与する因子の特定は概ね進めることができたため，論文投稿および学会発表の準備を行っている。

今年，我们的目标是确定表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCg）诱导细胞融合的相关因素，并进行了侧重于基因表达分析、细胞融合和功能的实验。我们将 EGCg 添加到 RAW264.7 细胞（破骨细胞前体细胞）中，并分析多核细胞组中的基因表达。为了进行比较，我们使用未治疗组或添加RANKL/M-CSF的组，其中诱导破骨细胞分化。将细胞接种在培养板上并在α-MEM培养基中培养3天，然后提取RNA并进行基因表达分析。通过吉姆萨染色并在荧光显微镜下观察细胞核和肌动蛋白环来评估细胞融合。通过TRAP染色和TRAP活性测量评估破骨细胞分化。微阵列分析和实时PCR定量基因表达的结果发现，与未治疗组相比，添加EGCg的组中与刺激和应激反应相关的因子的表达增加。实施计划的重点是蛋白质水平的评估，但评估细胞水平和细胞形态反应的重要性已经增加。我们检查了从一系列分析中选择的候选因子对细胞多核和融合的影响，并评估它们是否参与细胞融合。我们还比较了不同外部环境条件对细胞融合的影响，并检查这些反应是否通过破骨细胞分化的不同途径发生。由于EGCg的添加，我们在识别参与细胞融合的因子方面取得了很大进展，这也是本研究的目的，目前我们正在准备提交一篇论文并在学术会议上进行展示。