プロテア-ゼ感受性変異を応用したセンダイウィルス弱毒生ワクチンの実用化

利用蛋白酶敏感性突变的仙台病毒减毒活疫苗的实际应用

• 批准号: 01870023
• 负责人: 本間 守男
• 金额: $ 7.42万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01870023/
• 关键词: センダイウイルス; プロテア-ゼ変異株; 生ワクチン; 感染防御; トリプシン抵抗性変異株; センダイウイルス; プロテア-ゼ変異株; 生ワクチン; 感染防御; トリプシン抵抗性変異株

1.センダイウイルスMVC株のトリプシン抵抗性変異株の作製:我々および他の研究者の成績より、キモトリプシンあるいはエラスタ-ゼ感受性変異株は、トリプシン抵抗性を併せ持つことの多いことが明らかにされている。従って本研究では、キモトリプシンあるいはエラスタ-ゼ存在下でMVC株を培養し、それぞれの酵素感受性変異株の作製を試みた。また、変異誘発を目的として、ウイルスの亜硝酸ナトリウム処理あるいは紫外線照射を併用する実験も行なった。(1)紫外線照射したMVC株を、エラスタ-ゼ存在下でLLC-MK_2細胞を用いて培養すると、4株のエラスタ-ゼ感受性トリプシン抵抗性変異株(E-UV1,2,3および4)が得られた。(2)変異誘発処理を加えなかった場合には、エラスタ-ゼ感受性変異株は得られなかった。(3)キモトリプシン感受性変異株は、変異誘発処理を行なわない場合にも得ることができたが、それらはトリプシン抵抗性ではなかった。2.上記のエラスタ-ゼ感受性トリプシン抵抗性変異株(E-UV1および2)について、弱毒生ワクチンとしての有用性の検討を行なった。(1)E-UV1株およびE-UV2株を3週令マウスに経鼻接種し、体重増加曲線を指標にして病原性について調べたところ、両株とも、元来弱毒株である親株MVC株よりさらに弱毒化されていることがわかった。(2)E-UV2株をマウスに経鼻接種すると16HIU/mlの抗センダイウイルス抗体が誘導された。この抗体価は、親株MVC株により誘導される抗体価とほぼ同じであった。(3)E-UV1株およびE-UV2株が強毒株のチャレンジに対し感染防御能を誘導することが予備実験で認められた。現在、詳細な解析を継続している。

1。仙台病毒MVC菌株的耐胰蛋白酶耐药突变体的创建：我们和其他研究人员表明，辣椒蛋白酶或弹性酶敏感的突变体通常具有耐胰蛋白酶的耐药性。因此，在这项研究中，MVC菌株是在甲壳蛋白蛋白酶或弹性蛋白酶的存在下培养的，并试图产生每个酶敏感的突变体菌株。此外，进行了实验，其中用亚硝酸钠或紫外线照射处理病毒以进行诱变。 （1）当在存在弹性酶的情况下，使用LLC-MK_2细胞培养紫外线辐照的MVC菌株时，获得了四个弹性酶敏感的胰蛋白酶耐药突变体（E-UV1、2、3和4）。 （2）如果未应用诱变治疗，则未获得弹性酶敏感的突变体。 （3）即使没有执行诱变，也可以获得胰凝乳蛋白酶敏感的突变体，但它们不是抗胰蛋白酶的。 2。对上述弹性酶敏感的耐胰蛋白酶耐药突变体（E-UV1和2）进行了研究，以实现活疫苗的实用性。 （1）当将3周大的小鼠与E-UV1和E-UV2菌株接种时，使用体重增加曲线作为指示，研究了致病性，发现这两种菌株比最初减弱的父型MVC菌株更为减弱。 （2）用E-UV2菌株对小鼠的鼻内接种诱导16个HIU/mL的抗诊断病毒抗体。该抗体滴度与母体MVC菌株诱导的抗体滴度大致相同。 （3）初步实验表明，E-UV1和E-UV2菌株会诱导感染保护，以防止强烈有毒菌株的挑战。我们目前正在继续提供详细的分析。