オンチップ・セル・ソーティング法による間葉系幹細胞の予見的表面マーカーの同定

片上细胞分选法鉴定间充质干细胞的预测表面标志物

• 批准号: 25670832
• 负责人: 錦織 良
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25670832/
• 关键词: 再生医療; 抗体アレイ; 間葉系幹細胞; 表面抗原; 抗体チップ; 自己組織化単分子膜; 細胞の品質管理

歯科および整形外科の領域では、間葉系幹細胞（MSC）移植による骨組織の再生治療が盛んに研究されている。そのような治療をいっそう効果的に行うには、不均質なMSC 集団の中から骨分化能の高い細胞をその表面マーカーを利用して予め選別し、細胞品質を管理することが治療に有効であると考える。そこで本研究では、未分化状態のMSC に発現する表面マーカーと、分化培養を行なった後の骨分化の程度との相関を調べ、それによってMSC の予見的表面マーカーを同定することで、MSC の品質管理に応用するための方法として、オンチップ・セル・ソーティング法および、MSC の予見的マーカーとして候補となる表面マーカー／抗体を多数選び出し、これらの可能性を調査した。マイクロアレイの作製には、アルカンチオール自己組織化単分子膜のプラズマパターニング法を用いた。10種類程度の抗体を1種類ずつスポットに固定した。多種類の表面マーカーに対する多種類の抗体を配列固定した小さな抗体チップ（チップ）を作製した。そのチップ上に細胞を播種することによって、それぞれの表面マーカーを発現する細胞を抗体を固定化したスポット上に播種しソーティングを行った。抗体に対応した表面マーカーを発現した分化前のMSCの表面抗原発現パターンを簡便に分析評価することができた。また、文献を調査することでMSCに特異的に発現する予見的表面マーカーの候補が明らかになった。スポットに捉えられた細胞の数を数えることで、定量的な評価が可能であることが示唆された。抗体チップを用いることで、細胞表面に発現する各種マーカーをチップの使用により迅速に分析することが可能になった。この手法によって、再生医療におけるMSCの品質管理に関する研究が加速されるものと期待される。なお、代表者は文部科学省の専任義務のポジションに変わったため規則上科研の研究継続が出来なかった。

在牙科和骨科手术领域，积极研究使用间质干细胞（MSC）植入对骨组织的再生治疗。为了更有效地进行此类治疗，据信，使用其表面标记来管理与异质MSC种群高骨分化的细胞有效，以管理细胞质量。因此，在这项研究中，我们研究了在未分化的MSC中表达的表面标记与分化培养后的骨分化程度的相关性，因此确定了MSC的预测表面标记，并选择了大量的表面标记/抗体，这些标志物作为MSC作为MSC的候选者，作为MSC的预测标记，以应用MSC和MSC的质量控制能力，并进行了质量控制的可能性和可能的​​可能性。为了制造微阵列，使用了烷烃自组装单层的等离子体模式。将约10种类型的抗体固定在每个斑点上。制备了小抗体芯片（芯片），其中固定了各种表面标记的各种类型的抗体。将细胞播种在芯片上，并将表达每个表面标记的细胞播种在固定并分类抗体的斑点上。在与抗体相对应的表达表面标记之前，MSC的表面抗原表达模式可以很容易地进行分析和评估。此外，文献研究揭示了在MSC中专门表达的预测表面标记的候选者。计算现场捕获的细胞数量表明可以进行定量评估。使用抗体芯片可以通过使用芯片快速分析在细胞表面表达的各种标记。预计这种方法将加速对再生医学中MSC质量控制的研究。此外，教育，文化，体育，科学和技术部将代表更改为全职强制性的职位，因此由于法规，Kagaku研究所无法继续研究。

项目成果

Antibody microarrays fabricated through plasma-assisted micropatterning for Use in quality control of stem cells

通过等离子体辅助微图案制造的抗体微阵列用于干细胞的质量控制

• 发表时间: 2014
• 作者: 錦織良