Application of sensitive EMT/MET reporter to identification of target genes for breast cancer stem cells.

应用敏感的EMT/MET报告基因鉴定乳腺癌干细胞的靶基因。

• 批准号: 24650620
• 负责人: YOSHIKAWA Kiyotsugu
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24650620/
• 关键词: EMT; 乳癌幹細胞; MET; レポーター; 発現クローニング; トリプルネガティブ乳癌; 上皮間葉転換 (EMT); 間葉上皮転換 (MET); 乳癌; ライブラリースクリーニング

In order to identify cDNA/shRNA that can induce EMT or MET, we established a reporter system where vimentin or E-cadherin promoter drives blasticidine-resistant gene and GFP in HMLE epithelial or MDA-MB-231 mesenchymal breast cancer cell line. The cells were infected with cDNA or shRNA library and subjected to blasticidine selection. In EMT screening, Snail and Twist2 were identified as EMT inducer, and two genes, members of mitochondrial complex I, and a hub gene in signal transduction were identified to support soft aga-colonogenecity of mesenchymal cells. In MET screen, a potent MET-inducing shRNA (called shP1) was identified. The shP1 was tested for soft agar colony formation using monoclonal dual reporter cell clones from SUM159 mesenchymal breast cancer cell line. Interestingly, there are two sets of reporter clones with different response to shP1. Colony formation did not decreased in one set of reporter clones, while in the other clone shP1 reduced colony formation.

为了鉴定可以诱导 EMT 或 MET 的 cDNA/shRNA，我们在 HMLE 上皮或 MDA-MB-231 间充质乳腺癌细胞系中建立了一个报告系统，其中波形蛋白或 E-钙粘蛋白启动子驱动杀稻瘟素抗性基因和 GFP。 用cDNA或shRNA文库感染细胞并进行杀稻瘟剂选择。在EMT筛选中，Snail和Twist2被确定为EMT诱导剂，并且确定了两个基因（线粒体复合物I的成员）和信号转导中的枢纽基因以支持间充质细胞的软aga集落发生。在 MET 筛选中，鉴定出了一种有效的 MET 诱导 shRNA（称为 shP1）。使用来自 SUM159 间充质乳腺癌细胞系的单克隆双报告细胞克隆测试 shP1 的软琼脂集落形成。有趣的是，有两组报告克隆对 shP1 具有不同的反应。在一组报告克隆中，集落形成没有减少，而在另一组克隆中，shP1 减少了集落形成。

项目成果

Sal-like 4 (SALL4) is the factor for cell dispersion in basal-like breast cancer

Sal-like 4 (SALL4) 是基底样乳腺癌细胞分散的因子

• 发表时间: 2013
• 期刊: FEBS Letters
• 影响因子: 3.5
• 作者: Itou;J.;Matsumoto,Y.;Yoshikawa,Y.and Toi,M.
• 通讯作者: Yoshikawa,Y.and Toi,M.

大日本住友製薬ー京都大学(DSK)連携プロジェクト悪性制御研究ラボ

大日本住友制药-京都大学（DSK）合作项目恶性肿瘤控制研究实验室

Application of sensitive EMT reporter to identification of mammary stem cell-related genes

应用灵敏的EMT报告基因鉴定乳腺干细胞相关基因

• 发表时间: 2013
• 作者: Yoshikawa,K.;Matsumoto;Y.;Ito;J.;Shiojiri Y.;Reinherz E.;To M.
• 通讯作者: To M.

Application of sensitive epithelial-mesenchymal transition (EMT) reporter to identification of mammary stem cell-related genes

应用敏感的上皮间质转化（EMT）报告基因鉴定乳腺干细胞相关基因

• 发表时间: 2012
• 作者: 北田 昇雄;岩野 智;平野 誉;丹羽 治樹;牧 昌次郎;Yoshikawa K.
• 通讯作者: Yoshikawa K.

京都大学ー大日本住友製薬(DSK)連携プロジェクト悪性制御研究ラボ

京都大学-大日本住友制药 (DSK) 合作项目恶性肿瘤控制研究实验室