超高感度ELISA法を用いた感染症ウイルス同時測定法の開発

使用超灵敏 ELISA 法同时测定传染性病毒的方法的开发

• 批准号: 22KJ2936
• 负责人: 教誓 祐太
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2936/
• 关键词: 新型コロナウイルス; チオNADサイクリングELISA法; 高感度測定

感染症ウイルスとして、現在世界中で感染拡大している新型コロナウイルスに対してチオNADサイクリングELISA法の開発を行なった。はじめに新型コロナウイルスに着目することでチオNADサイクリングELISA法が感染症ウイルスに対して有効であることを示したい。したがって、新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)を用いて同方法の検出限界を算出し、測定法の限界を求めた。チオNADサイクリングELISA法によって新型コロナウイルスのスパイクタンパク質・ヌクレオカプシドタンパク質において約10^-18 moles/assayで測定可能であることが示唆された。市販のELISAキットでは数ng/mL~100 pg/mLの検出限界であることが多いため、100~1000倍感度が高いことがわかり、高感度での測定が可能であった。この結果を踏まえて、大阪大学微生物病研究所から提供された紫外線照射(UVB)によって不活性化されたSARS-CoV-2をもちいて実際の新型コロナウイルスに対してチオNADサイクリングELISA法を用いることができるのか測定を行った。結果としてスパイクタンパク質では10^5 copies/assay、ヌクレオカプシドタンパク質では10^4 copies/assayで測定することに成功した。先行研究では新型コロナウイルス感染患者の検体からは10^5〜10^6 copies以上のウイルスが検出されることがわかっているため本方法では検体の検出が可能であることが示唆された。

作为一种传染病病毒，我们已经开发了一种新型冠状病毒的Thionad Cycling ELISA方法，该方法目前正在世界各地传播。首先，通过关注新的冠状病毒，我们要证明锡NAD循环ELISA方法有效地抵抗了传染病病毒。因此，该方法的检测极限是使用新型冠状病毒（SARS-COV-2）计算的，并确定了测量方法的极限。 Thionad Cycling Elisa表明，在新型冠状病毒的尖峰蛋白和核蛋白质蛋白中，可以在大约10^-18摩尔/测定中进行测量。市售的ELISA试剂盒通常具有几个Ng/ml至100 pg/ml的检测极限，因此发现灵敏度高100至1000倍，从而使测量值高灵敏度。基于这些结果，我们测量了是否可以使用大阪大学微生物疾病研究所提供的紫外线辐射（UVB）使用SARS-COV-2对实际的新型冠状病毒进行了测量。结果，我们能够成功测量峰值蛋白的10^5拷贝/测定法和10^4拷贝/分析的核蛋白质蛋白。先前的研究表明，在感染了新型冠状病毒的患者的标本中，可以检测到10^5至10^6或更多的病毒，因此这种方法表明可以检测样品。

项目成果

チオNADサイクリングELISA法による新型コロナウイルスおよびインフルエンザウイルスA型の模擬汚水測定

采用Thio-NAD循环ELISA法模拟废水测定新型冠状病毒和甲型流感病毒

• 发表时间: 2023
• 作者: 末武康弘;得丸智子;古井戸祐樹;Taiki Takeuchi;武内太貴;Taiki Takeuchi;Taiki Takeuchi;Taiki Takeuchi;武内太貴;武内太貴;武内太貴;Taiki Takeuchi;谷川春菜;教誓 祐太
• 通讯作者: 教誓 祐太

Development of thio-NAD Cycling ELISA for Detection of SARS-CoV-2 and Influenza Virus Type A

开发用于检测 SARS-CoV-2 和 A 型流感病毒的硫代 NAD 循环 ELISA

• 发表时间: 2022
• 作者: 末武康弘;得丸智子;古井戸祐樹;Taiki Takeuchi;武内太貴;Taiki Takeuchi;Taiki Takeuchi;Taiki Takeuchi;武内太貴;武内太貴;武内太貴;Taiki Takeuchi;谷川春菜;教誓 祐太;教誓 祐太
• 通讯作者: 教誓 祐太