細胞接着性膜タンパク質を搭載したエンベロープ型人工ウイルスキャプシドの構築

负载细胞粘附膜蛋白的有包膜人工病毒衣壳的构建

• 批准号: 22KJ2297
• 负责人: 古川 寛人
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2297/
• 关键词: エンベロープウイルスレプリカ; β-Annulus; ワクチン; エンベロープ型ウイルスレプリカ; 無細胞タンパク質発現

今年度の研究では、従来のワクチン材料では困難であった、抗原とアジュバントを自在にかつ均一に搭載させた新規ワクチン材料の開発を検討した。具体的には、乳がん抗原ペプチドCH401ペプチドと脂質アジュバントα-GalCerを提示したエンベロープウイルスレプリカを創製し、モデルマウスへの投与及び免疫評価を行った。Fmoc固相法により合成したβ-Annulus-EE-GGGCGペプチドにBismaleimide-PEG12リンカーを介してCys-CH401ペプチドを連結することでβ-Annulus-EE-CH401ペプチドを合成した。β-Annulus-EE-CH401の自己集合挙動をDLS・ζ電位・TEMにより評価した結果、表面がアニオン性で74±26 nmの人工ウイルスキャプシドの形成が確認された。この球状集合体にα-GalCer/DOTAP/DOPC混合脂質を複合化した結果、粒径が97±28 nmに増大し、ζ電位がカチオン性にシフトした。またTEMにより、100 nm程度の球状粒子表面にCH401ペプチドと思われる5 nm程度のドット状構造が多数観察された。以上の結果より、抗原/脂質アジュバント搭載エンベロープウイルスレプリカの構築が示唆された。次に、モデルマウスへの腹腔投与後の免疫活性化評価では抗原特異的な強力な免疫活性が確認された。さらに、α-GalCerの搭載によりアレルギー応答に関与するサイトカイン放出の抑制に成功した。以上の結果より、完全人工合成によりボトムアップかつ自在に機能を付与可能な新規ワクチン材料の開発に成功した。

今年的研究研究了新的疫苗材料的开发，这些疫苗材料允许抗原和佐剂可以自由均匀地安装，这很难与常规疫苗材料一起使用。具体而言，创建了一种包裹的病毒复制品，该复制品呈现出乳腺癌抗原肽CH401和脂质辅助α-甲氧酸酯，并用于模型小鼠，并进行了评估以获得免疫力。通过通过Bismaleimide-Peg12连接器与β-Annulus-EEE-EE-EEGGGCG肽合成的β-Annulus-EE-CH401肽合成了Cys-CH401肽通过FMOC固相方法合成的。使用DLS，ζ电位和TEM评估了β-Annulus-EE-CH401的自组装行为，并确认了人工病毒capsid的阴离子表面为74±26 nm。将球形组件与α-盖尔/dotap/dopc混合脂质结合使用，粒径增加到97±28 nm，ζ电位转移到阳离子上。此外，通过TEM，在大约100 nm处的球形颗粒表面上观察到许多约5 nm的点样结构，被认为是CH401肽。以上结果表明，进行了用抗原/脂质辅助的构造信封病毒复制品。接下来，腹膜施用后的免疫激活评估对小鼠进行建模，证实了有效的抗原特异性免疫活性。此外，通过掺入α-伽利亚剂，我们成功地抑制了参与过敏反应的细胞因子的释放。基于上述结果，我们成功地开发了一种新的疫苗材料，该疫苗材料可以通过完整的人工合成以自下而上的方式提供功能。

项目成果

エンベロープ型ウイルスを模倣した膜タンパク質搭載人固ウイルスキャプシドの創製

创建载有模拟包膜病毒的膜蛋白的人类特异性病毒衣壳

• 发表时间: 2021
• 作者: 古川寛人;中村圭吾;稲葉央;佐々木善浩;澤田晋一;秋吉一成;松浦和則
• 通讯作者: 松浦和則

エンベロープ型人工ウイルスキャプシドの細胞内導入及び膜タンパク質搭載

细胞内引入有包膜的人工病毒衣壳和膜蛋白负载

• 发表时间: 2021
• 作者: 古川寛人;稲葉央;佐々木善浩;秋吉一成;松浦和則
• 通讯作者: 松浦和則

膜タンパク質を搭載したエンベロープ型ウイルスレプリカの創製

创建负载膜蛋白的包膜病毒复制品

• 发表时间: 2022
• 作者: 古川寛人，中村圭吾，稲葉央，澤田晋一，佐々木善浩，秋吉一成，松浦和則

エンベロープ型人工ウイルスキャプシドの細胞内導入と取込機構の評価

将有包膜的人工病毒衣壳引入细胞并评估摄取机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 古川寛人;木村優菜;坂本健太郎;稲葉央;松浦和則
• 通讯作者: 松浦和則

Construction of enveloped artificial viral capsid equipped with membrane proteins

配备膜蛋白的有包膜人工病毒衣壳的构建

• 发表时间: 2021
• 作者: 古川寛人;稲葉央;佐々木善浩;秋吉一成;松浦和則
• 通讯作者: 松浦和則