自己複製能を有する人工ウイルスの創製

创造具有自我复制能力的人造病毒

基本信息

  • 批准号:
    22KJ2296
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.33万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2023
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2023-03-08 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究では、自己複製能を有する人工ウイルスの創製に向けた各種構成要素の作製に取り組んでいる。前年度は、細胞内に自己をコードするようなmRNAを送達できる人工ウイルスキャプシドを構成するlambdaN-beta-annulus-infectious peptideの合成に取り組んだ。ここで、lambdaNはBoxBというRNA配列と相互作用するペプチド、beta-annulusは水中で自己集合し人工ウイルスキャプシドを形成するペプチド、infectious peptideは細胞への感染に関与することが期待されるペプチドである。より良いinfectious peptideを得るために6種類のinfectious peptideを選出し、それぞれのlambdaN-beta-annulus-infectious peptideの合成に取り組んだ。Native chemical ligation, 無細胞タンパク質発現系では芳しい結果が得られなかったが、大腸菌でのタンパク質発現を通して目的のペプチドを得ることに成功した。これと並行して、lambdaN-beta-annulus-infectious peptideによる細胞内へのmRNA送達能を評価するためのreporter mRNAの設計及び作成にも取り組んだ。EGFPの上流にT7 promoterおよびinternal ribosomal entry site (IRES) を、下流にスペーサーを介してBoxBを有するように転写されるよう設計したプラスミドからin vitro transcription, ポリAテール付加によってreporter mRNAを得ることに成功した。これをHepG2細胞にトランスフェクションするとEGFPの発現が確認されたことから、設計したmRNAがレポーターとして機能することが示唆された。
在这项研究中,我们正在致力于创造各种组件来创造具有自我复制能力的人造病毒。去年,我们致力于合成 lambdaN-β-环感染肽,它构成了一种人造病毒衣壳,可以将自编码 mRNA 传递到细胞中。这里,lambdaN是一种与RNA序列BoxB相互作用的肽,β-annulus是一种在水中自组装形成人工病毒衣壳的肽,感染性肽是一种预期参与细胞感染的肽。为了获得更好的感染肽,我们选择了六种感染肽,并致力于合成每种lambdaN-β-环感染肽。天然化学连接和无细胞蛋白表达系统没有得到很好的结果,但我们通过在大肠杆菌中蛋白表达成功获得了目标肽。与此同时,我们还致力于设计和创建报告基因 mRNA,以评估 lambdaN-β-环感染肽将 mRNA 递送至细胞的能力。报告基因 mRNA 是通过体外转录和从设计有 T7 启动子和 EGFP 上游的内部核糖体进入位点 (IRES) 和通过间隔子下游的 BoxB 的质粒中添加多聚 A 尾部获得的。当将其转染到 HepG2 细胞中时,证实了 EGFP 的表达,这表明设计的 mRNA 具有报告基因的功能。

项目成果

期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
人工ウイルスキャプシドによる生体高分子のサイトゾル送達
通过人工病毒衣壳进行生物聚合物的胞质递送
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Sakamoto Kentarou;Furukawa Hiroto;Arafiles Jan Vincent V.;Imanishi Miki;Matsuura Kazunori;Futaki Shiroh;坂本 健太郎
  • 通讯作者:
    坂本 健太郎
生体高分子をサイトゾルに送達する人工ウイルスキャプシド
将生物聚合物输送到细胞质的人工病毒衣壳
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Sakamoto Kentarou;Furukawa Hiroto;Arafiles Jan Vincent V.;Imanishi Miki;Matsuura Kazunori;Futaki Shiroh;坂本 健太郎;坂本 健太郎
  • 通讯作者:
    坂本 健太郎
Artificial Nanocage Formed via Self-Assembly of β-Annulus Peptide for Delivering Biofunctional Proteins into Cell Interiors
通过 β-环肽自组装形成人工纳米笼,用于将生物功能蛋白递送到细胞内部
  • DOI:
    10.1021/acs.bioconjchem.1c00534
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    4.7
  • 作者:
    Sakamoto Kentarou;Furukawa Hiroto;Arafiles Jan Vincent V.;Imanishi Miki;Matsuura Kazunori;Futaki Shiroh
  • 通讯作者:
    Futaki Shiroh
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