フタル酸エステルの母体暴露が世代を越えて精子形成異常を引き起こすエピ変異の解明

阐明由于母体接触邻苯二甲酸酯而导致各代精子发生异常的表观突变

• 批准号: 18J40019
• 负责人: 丹藤 由希子
• 金额: $ 2.33万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18J40019/
• 关键词: DEHP; DNAメチル化; 精子形成

プラスチックの可塑剤として社会生活の中で広範囲に用いられているジエチルヘキシルフタル酸（DEHP）を妊娠マウスに暴露すると、F1からF3の雄で精子や精細管の異常および精原細胞の機能異常が認められ、それがDNAメチル化変化によるものと考えられている。しかし、そのメカニズムは明らかになっていない。そこで本研究は、DEHPが世代を越えて精子形成に異常を及ぼすエピゲノム変異を同定することを目的としている。本年度は以下の項目を実施した。１．DEHP母体暴露による生殖細胞のエピ変異遺伝子候補の選出昨年度に施行したDEHP母体暴露後F1の精原細胞を用いたメチローム解析にて、DEHP母体暴露直後の胎齢19.5 日目に高メチル化が見られた精子形成関連遺伝子のうち，11遺伝子が精原細胞でも維持されていることが分かった。他個体の精原細胞で上記11遺伝子の発現を定量PCRで検証したところ、これらの中で3遺伝子の発現の有意な低下を認め、トランスクリプトームの結果も同様の発現低下を示した。またバイサルファイトシーケンスにて、メチロームの結果と同様に3遺伝子のメチル化率の増加を示した。２．エピ変異候補遺伝子のメチル化による発現制御の検証上記の定量PCRの結果で発現低下を認めた3遺伝子について、RRBSで検出されたプロモーター領域のメチル化が遺伝子発現の低下を誘導するか否かをin vitroで検証することにした。RRBSで検出したメチル化領域をクローニングしてアッセイ用ベクターに組み込み、HEK293T細胞にトランスフェクションした。48時間後の細胞を回収してルシフェラーゼアッセイを行った結果、3遺伝子全てにおいてメチル化したコンストラクトでルシフェラーゼ活性の有意な低下を認めた。よって、3遺伝子の発現はプロモーターのメチル化により制御を受けることが示された。

在社交生活中广泛用作塑料增塑剂的二乙基己基二酸（DEHP）在精子中是异常的，消费者管和来自F1的富含F1的富含活细胞的异常。 DNA甲基的变化。但是，该机制尚未得到揭示。因此，这项研究旨在确定表观基因的突变超过世代和精子形成异常。今年进行了以下项目。 1。 DEHP母体暴露于去年的EPI EPI候选候选候选者，在DEHP母体暴露之后，使用F1 F1 F1 F1 fter的甲基室分析在暴露于DEHP后立即暴露于19.5天的胎儿年龄。通过与精子相关基因的词汇细胞中保持。当在其他个体的其他个体中用定量PCR验证上述11个基因的表达时，在这些基因的表达中识别出三个基因的表达显着降低，并且经骨的结果显示出相同的表达。在Bissal战斗序列中，这三个基因的甲基化速率的量与甲基菌的结果相同。 2。通过对3个基因的突变候选基因甲基化对表达控制的验证，该基因在上述定量PCR中的表达降低，RRB检测到的启动子面积的甲基化是否会导致基因表达降低。体外。将RRB检测到的甲基化区域克隆并掺入分析载体中，并将​​其转移到HEK293T细胞中。由于48小时后恢复细胞并进行荧光素酶测定，因此人们认识到荧光素酶活性在所有三个基因上都是显着的。因此，结果表明，这三个基因的表达是由启动子的甲基化控制的。

项目成果

Epi-mutations for spermatogenic defects by maternal exposure to Di (2-ethylhexyl) phthalate

• DOI: 10.1101/2021.05.19.444770
• 发表时间: 2021-05
• 期刊: bioRxiv
• 作者: Yukiko Tando;H. Hiura;Asuka Takehara;Yumi Ito-Matsuoka;T. Arima;Y. Matsui