植物寄生性センチュウの感染機構の解析

植物寄生线虫侵染机制分析

• 批准号: 16J40067
• 负责人: 光増 可奈子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16J40067/
• 关键词: 植物寄生性センチュウ; 根こぶ形成; 誘引物質

本研究では、植物寄生性センチュウの宿主植物への感染及びネコブ形成過程に注目し、植物根及び種子由来の線虫誘引物質の探索と、ネコブ形成に関与するセンチュウエフェクタータンパク質の作用機構、及び植物細胞内シグナル伝達機構の解析を平行して進めることで、センチュウ感染過程の分子機構の全体的な理解を目指している。本年度は、ネコブ形成に関わるセンチュウエフェクタータンパク質の果たす役割に関して、更に詳細に解析することにした。前年度までに、エフェクタータンパク質MjD15は、宿主植物の細胞質分裂を制御するANP-MAP65カスケードの構成因子である、ANP1, ANP2のキナーゼドメインと相互作用しており、且つ、ANP1, ANP2を活性化しないことが示唆されていたので、今回は、MjD15によるANP1, ANP2活性の抑制について検討した。まず、MAPKシグナル経路改変酵母株を用いた機能評価や、ベンサミアナタバコの自己免疫応答系の働きを利用した、ANP1, ANP2のキナーゼ活性の抑制効果の評価を試みたが、適切な評価系が構築できなかった。そこで、次の方策として、各因子のタンパク質を用いたキナーゼアッセイ系による評価を試みた。まず、プロトプラストに各因子の発現プラスミドを導入したが、MjD15のプロトプラスト内での発現量が十分に得られなかったので、in vitro転写・翻訳系を用いて発現させることにした。現在、各々のタンパク質の発現とそれらの相互作用を確認し、キナーゼアッセイによって、MjD15のANP1, ANP2活性へ及ぼす影響の評価を試みている段階である。MjD15の機能の解明には至らなかったものの、評価系の構築と改善により、MjD15がANP-MAP65経路をどのように修飾し、ネコブ形成に寄与しているのかを明らかにするための足がかりを得ることができた。

这项研究的重点是将植物寄生虫线虫感染给宿主植物和猫的形成，旨在通过探索植物的根和种子衍生的线虫吸引剂的植物根和种子吸引剂，以及在Nematode效应的机制中分析猫蛋白的机制，以及与猫形式的机制以及纳入的机制以及纳入的机制，以及纳入的机制以及纳入的机制，以及各种机构以及纳入的机制，以及各种机构以及各种机构以及各种机制，以及以及纳入的机制。今年，我们决定更详细地分析线虫效应子蛋白在猫形成中的作用。到上一年，据建议，效应蛋白MJD15与ANP1和ANP2的激酶结构域相互作用，ANP1和ANP2是ANP-MAP65级联反应的构成因子，可调节宿主植物中的细胞因子，并且它不会激活ANP1和ANP2。在本文中，我们研究了MJD15对ANP1和ANP2活性的抑制。首先，我们试图使用改变MAPK信号途径的酵母菌菌株评估功能评估，并使用本萨米亚纳烟草的自身免疫反应系统的功能评估ANP1和ANP2激酶活性的抑制作用，但是无法构建适当的评估系统。因此，作为下一个措施，我们尝试使用激酶测定系统评估每个因子的蛋白质。首先，将每个因子的表达质粒引入原生质体中，但是原生质体内MJD15的表达水平不够，因此决定使用体外转录/翻译系统表达它。目前，我们正在尝试确认每种蛋​​白质及其相互作用的表达，并通过激酶测定法评估MJD15对ANP1，ANP2活性的影响。尽管尚不清楚MJD15的功能，但评估系统的构建和改进提供了垫脚石，以阐明MJD15如何修改ANP-MAP65途径并有助于猫的形成。