テーラーメイドのがん免疫治療に向けた新しい細胞傷害性T細胞測定法の確立

建立一种测量细胞毒性 T 细胞的新方法，用于定制癌症免疫治疗

• 批准号: 18K15430
• 负责人: 高木 徹
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K15430/
• 关键词: 細胞傷害性T細胞; フローサイトメトリー; FACS; がん; CTL; 細胞傷害性試験; テーラーメイド治療

研究の目的は、ヒト固形がんのほぼすべてに発現しているがん抗原WT1 に着目し、WT1特異的CTLを用いた細胞傷害性試験を行い、同時に免疫チェックポイン ト 分子の発現を確認し、そのデータがテーラーメイド医療に繋げることができるかどうかを明らかにすることである。今年度はHLA-A24について検討を行った。既に作製済みであったHLA-A24を発現する標的細胞に、GFPを発現するベクターを導入した。GFP発現細胞をセルソーターで採取しクローニングして、HLA-A24/GFP発 現標的細胞を作製した。その後、HLA-A24トランスジェニックマウスをAd-M1で免疫し、1 週間後に脾臓を摘出して脾リンパ球をプライマリーCTLとして用いて、HLA-A2と同様の実験を行い、HLA-A24についても問題なく測定できることを確認した。次に換えアデノウイルス (Ad-WT1)を、HLA-A2、もしく はHLA-A24トランスジェニックマウスに免疫した。免疫後1週間で脾臓を摘出し、脾リンパ 球をプライマリーエフェクターCTLとして使用した。標的細胞には各HLA型に合うWT1由来ペプチドをパルスしたものを使用した。まずPI染色を用いて、このCTLが抗原特異的にGFP 発現標的細胞を傷害するかどうかを、フローサイトメトリーで測定した。さらにアポトーシスのマーカーであるAnnexin-VとCaspase-3の測定を行った。

该研究的目的是关注几乎在所有人类实体瘤中表达的癌症抗原WT1，并利用WT1特异性CTL进行细胞毒性测试，以及确认免疫检查点分子的表达，并澄清。这些数据是否可以与量身定制的医疗服务联系起来。今年，我们研究了 HLA-A24。将表达GFP的载体引入到已经产生的表达HLA-A24的靶细胞中。使用细胞分选仪收集表达 GFP 的细胞并克隆以创建表达 HLA-A24/GFP 的靶细胞。随后，我们用Ad-M1免疫HLA-A24转基因小鼠，一周后摘除其脾脏，并使用脾淋巴细胞作为初级CTL进行与HLA-A2类似的实验，证实可以毫无问题地进行测量。接下来，用重组腺病毒（Ad-WT1）免疫HLA-A2或HLA-A24转基因小鼠。免疫后一周，取出脾脏并使用脾淋巴细胞作为初级效应CTL。使用的靶细胞是用与每种 HLA 类型相匹配的 WT1 衍生肽进行脉冲的细胞。首先，我们使用 PI 染色，通过流式细胞术测量这些 CTL 是否能够抗原特异性损伤表达 GFP 的靶细胞。此外，我们还测量了细胞凋亡标志物 Annexin-V 和 Caspase-3。

项目成果

Identification of HLA-A*02:01-restricted CTL epitopes derived from ORF1a polyprotein of SARS-CoV-2

鉴定源自 SARS-CoV-2 ORF1a 多蛋白的 HLA-A*02:01 限制性 CTL 表位

• 发表时间: 2020
• 作者: Masanori Matsui;Akira Takagi
• 通讯作者: Akira Takagi