乳腺アポクリン癌の細胞形態とPI3K遺伝子変異との関連性の解明

阐明乳腺癌顶浆癌细胞形态与PI3K基因突变的关系

• 批准号: 18K15096
• 负责人: 野嵜 史
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Nihon University (2021-2022)St. Luke's International University (2018-2020)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K15096/
• 关键词: 乳癌; アポクリン癌; PI3K遺伝子変異; PIK3CA; PI3K遺伝子; PI3K

癌細胞の形態から分子治療標的となる遺伝子異常の存在が予測できるかどうかを明らかにし、病理形態診断の新たな可能性にせまることを目的としている。前年度までに、PIK3CA遺伝子変異ホットスポット部に変異が認められていない乳癌培養細胞（HCC1428）をもちいて、PIK3CA遺伝子exon 20のkinase domainで ある(H1047R[c.3140A>G])部位の遺伝子変異導入を、CRISPR-Cas9法を用い、エレクトロポレーション法にて行った。変異導入後の細胞よりDNAを抽出し、制限酵素法およびダイレクトシーケンス法を用いて検索し、変異導入が行われていることは確認された。次に導入細胞について、変異導入細胞の選別を試みたが、増殖が遅いためか、conditioned mediumなどを用いて生育を促したものの、シングルセルクローニングが困難であった。ヒト乳癌手術検体をもちいて、PIK3CA遺伝子変異解析についての検討を行うために、前年度に作成済のTMAブロックをもちいて、組織切片作成・DNA抽出を行ったが、ブロックを作成してから時間が経過していたためか、DNA抽出およびpcr法による遺伝子増幅が困難であった。RNA抽出後にcDNA合成、pcr法による遺伝子増幅も試みたが、やはり検出困難であった。そこで、ブロック作成からより経過年数の浅いブロックをもちい、DNA抽出、pcr増幅の検討を行ったところ、検出が可能であった。よって、経過年数の浅いアポクリン癌（術前療法無し）とその対象となる浸潤癌を選出し、DNA抽出とpcr法による遺伝子増幅、PIK3CA遺伝子変異解析を施行中である。

目的是阐明是否可以预测从癌细胞形态中预测的遗传异常的存在，并为病理形态诊断带来新的可能性。到上一年，PIK3CA基因外显子20基因突变与培养的乳腺癌细胞（HCC1428）的位点（H1047R [C.3140A> g]）引入了遗传突变，其中使用CRISPR-Cas9方法和电子塑料方法在PIK3CA基因的热点区域中未观察到在其中在PIK3CA基因的热点区域中观察到突变。在诱变后从细胞中提取DNA，并使用限制酶和直接测序方法进行搜索，并证实正在进行诱变。接下来，我们试图将诱变细胞分类到引入的细胞中，但也许是由于生长缓慢，使用条件培养基或类似的生长促进了生长，但是很难单细胞克隆。为了使用人乳腺癌手术标本研究PIK3CA基因突变分析，创建了组织切片并使用上一年创建的TMA块提取DNA，但是也许是因为自创建以来已经过去了时间，因此很难使用PCR方法提取DNA和扩增基因。提取RNA后，还尝试通过PCR方法进行cDNA合成和基因扩增，但仍然很难进行检测。因此，我们研究了自创建块以来较少的DNA提取和PCR扩增，并发现该检测是可能的。因此，已经选择了已经存在了一段时间（没有术前治疗）及其靶向性癌症的根本性癌，并且正在进行DNA提取，通过PCR方法扩增基因扩增和PIK3CA基因突变分析。

项目成果

乳腺アポクリン癌培養細胞における、PIK3CA抑制効果の検討

培养的乳腺癌顶浆癌细胞中 PIK3CA 抑制作用的检测

• 发表时间: 2020
• 作者: Masugi Y;Abe T;Ueno A;Fujii-Nishimura Y;Ojima H;Endo Y;Fujita Y;Kitago M;Shinoda M;Kitagawa Y;Sakamoto M;野嵜史
• 通讯作者: 野嵜史

妊娠期乳癌における遺伝子発現解析

妊娠乳腺癌的基因表达分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Fujita;Y. Matsuda;S. Sasaki;Y. Masugi;Y. Kitago;M. Yagi;H. Abe;Y. Shinoda;M. Tokino;T. Sakamoto;M. Kitagawa;Y.;野嵜 史
• 通讯作者: 野嵜 史

低異型度乳管内病変の診断と臨床の対応 乳管内癌の異型度

乳腺导管内低度病变的诊断与临床治疗 导管内癌的分级

• 发表时间: 2022
• 作者: 増田 しのぶ;野嵜 史
• 通讯作者: 野嵜 史