Regulation mechanism of apoptosis-inducing death receptor localization allowing for survival in tumor cells
凋亡诱导死亡受体定位的调节机制允许肿瘤细胞存活
基本信息
- 批准号:19K07648
- 负责人:
- 金额:$ 2.75万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2019
- 资助国家:日本
- 起止时间:2019-04-01 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
リガンドであるTRAIL分子と、細胞膜上で結合して細胞死を誘導するDR5タンパク質が、TRAIL耐性腫瘍細胞内では細胞膜より核に大量に局在するこれまでの実験事実を元に、DR5の局在を制御して細胞膜での発現を高めて、腫瘍細胞に対して広く細胞死誘導を可能にする機能分子を探索する目的で、バーコード化された約6,500種類のヒトタンパク質に対する約55,000種類のshRNAを含む、ヒトゲノムワイドshRNAライブラリーのモジュール#2(標的遺伝子:疾患関連遺伝子、薬剤標的遺伝子)を用いた。HEK293Tで調整した偽ウイルス粒子を、単なるTRAIL低感受性HeLa細胞株ではなく、HeLa細胞株にdeath domain欠損GFP-DR5を予め遺伝子移入した細胞に感染させてshRNAを遺伝子導入した。shRNAの選択薬剤であるDoxycyclineとGFP-DR5の選択薬剤であるG418共存下で培養、細胞膜に発現するDR5をPacific blue標識抗体で蛍光標識し、shRNAと共に遺伝子導入したTagRFP発現細胞で且つGFP発現細胞の中で、親株の細胞よりも細胞膜のDR5発現が高い細胞集団(DR5 high)をFACSでソートした。初回ソートでDR5 highはわずか0.7%だったが、5回目のソートで約50%に濃縮された。この細胞集団のコントロールとして、同様に遺伝子導入を行い、TagRFP陽性細胞で細胞膜DR5の発現が低い約80%の細胞をソートした。これらの細胞をレーザー顕微鏡で観察すると、GFP-DR5の蛍光がDR5 high の細胞では核に観察されず、ER領域と細胞膜に極めて明るく検出された。 一方、コントロール細胞は、主に核にGFP-DR5が観察され、細胞質や細胞膜の発現は弱く、ER領域の集積は認められなかった。そこで、これら2種類の細胞集団の遺伝子受託解析を依頼する。
基于之前的实验发现,在TRAIL抗性肿瘤细胞中,与细胞膜上的配体TRAIL分子结合并诱导细胞死亡的DR5蛋白大量定位于细胞核而不是细胞膜,我们确定了该定位DR5 控制其在细胞膜上的表达并诱导多种肿瘤细胞的细胞死亡。人类全基因组shRNA文库模块#2(靶基因:疾病相关基因、药物靶基因)。用 HEK293T 制备的假病毒颗粒不仅用于感染 TRAIL 敏感性低的 HeLa 细胞系,还用于感染先前已用死亡结构域缺陷的 GFP-DR5 转染的 HeLa 细胞系,并将 shRNA 引入该细胞系。将表达TagRFP的细胞和表达GFP的细胞在shRNA选择性药物多西环素和GFP-DR5选择性药物G418共存下培养,细胞膜上表达的DR5用太平洋蓝标记进行荧光标记。其中,通过FACS分选细胞膜中DR5表达高于亲本株细胞(DR5高)的细胞群。第一次排序时DR5高只有0.7%,但第五次排序时集中到50%左右。作为该细胞群的对照,以相同的方式进行基因导入,分选约80%的细胞膜DR5低表达的TagRFP阳性细胞。当使用激光显微镜观察这些细胞时,在DR5高细胞的细胞核中未观察到GFP-DR5荧光,但在ER区域和细胞膜中检测到极其明亮的荧光。 另一方面,在对照细胞中,GFP-DR5主要在细胞核中观察到,在细胞质和细胞膜中表达较弱,并且在ER区域中没有积累。因此,我们将要求对这两类细胞群进行合同基因分析。
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Inhibition of Importin β1 Augments the Anticancer Effect of Agonistic Anti-Death Receptor 5 Antibody in TRAIL-Resistant Tumor Cells
抑制 Importin β1 可增强激动性抗死亡受体 5 抗体在 TRAIL 耐药肿瘤细胞中的抗癌作用
- DOI:10.1158/1535-7163.mct-19-0597
- 发表时间:2020
- 期刊:
- 影响因子:5.7
- 作者:Yuko Kojima; Takashi Nishina; Hiroyasu Nakano; Ko Okumura; Kazuyoshi Takeda
- 通讯作者:Kazuyoshi Takeda
Importin β1 inhibition augments anticancer effect of anti-DR5 agonistic antibody in TRAIL resistant tumor cells
Importin β1 抑制增强抗 DR5 激动性抗体在 TRAIL 耐药肿瘤细胞中的抗癌作用
- DOI:
- 发表时间:2019
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Yuko Kojima; Takashi Nishina; Hiroyasu Nakano; Ko Okumura; Kazuyoshi Takeda
- 通讯作者:Kazuyoshi Takeda
Inhibition of Importin β1 Augments the Anticancer Effect of Agonistic Anti-Death Receptor 5 Antibody in TRAIL-Resistant Tumor Cells
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- DOI:10.1158/1535-7163.mct-19-0597
- 发表时间:2020
- 期刊:
- 影响因子:5.7
- 作者:Yuko Kojima; Takashi Nishina; Hiroyasu Nakano; Ko Okumura; Kazuyoshi Takeda
- 通讯作者:Kazuyoshi Takeda
Importin β1 inhibition augments anticancer effect of anti-DR5 agonistic antibody in TRAIL resistant tumor cells
Importin β1 抑制增强抗 DR5 激动性抗体在 TRAIL 耐药肿瘤细胞中的抗癌作用
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- 发表时间:2019
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- 作者:Yuko Kojima; Takashi Nishina; Hiroyasu Nakano; Ko Okumura; Kazuyoshi Takeda
- 通讯作者:Kazuyoshi Takeda
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小島 裕子 - 通讯作者:
小島 裕子
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