生活習慣病に合併する肝癌の早期診断マーカーの開発：血中細胞外小胞の解析

生活方式相关疾病相关肝癌早期诊断标志物的开发：血液细胞外囊泡分析

• 批准号: 19K11640
• 负责人: 山口 奈津
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K11640/
• 关键词: 肝がん; 細胞外小胞; 非B非C型肝癌; 生活習慣病

本研究では、肝癌識別能が高く、かつ侵襲性の低い早期診断マーカーを開発するため、血中細胞外小胞において肝癌特異的に高発現するタンパク質を明らかにすることを目的としている。細胞外小胞を血液から分離する方法については、様々なキットが開発されているものの、スタンダードとなる方法はいまだ確立していない。本研究の研究協力者が開発した新たな調整法は、細胞外小胞を凝集させずに分離することにより、従来法よりもはるかに正確なEVのデータを得ることができる。この調整法を参考に、Hepatocellular carcinoma由来の肝癌由来細胞株としてHuh-7を、非がん細胞株としてOUMS-36等を用い、培養上清から細胞外小胞を精製する条件の検討を進めた。今後、精製して得られた細胞外小胞を用いて、質量分析法により発現タンパク質の解析を行い、肝がん由来細胞株で高発現するタンパク質をマーカー候補として同定する予定である。一方、臨床検体を用いた解析では、既に入手済みの検体を用いて、糖尿病症例および肝癌症例の血中細胞外小胞について、候補タンパク質の発現解析を行う予定としている。これに加えて、糖尿病を対照症例とする本研究において肝癌症例の血中細胞外小胞に特異的に発現するタンパク質を明らかにする上で重要であることから、非癌非糖尿病症例と糖尿病症例を比較できる血液検体を入手するため、当該コホート研究の検体収集に全面的に参画した。検体処理、管理、各種検査依頼までの一連のプロセスの立ち上げおよび実施業務を１年半にわたり行ったところである。

这项研究旨在阐明血液外囊泡中细胞外肝癌中高度表达的蛋白质，以形成早期诊断标记，这些标志物高度能够区分肝癌且侵入性较低。尽管已经开发了各种试剂盒来将细胞外囊泡与血液分离，但尚未确定标准方法。研究合作伙伴在本研究中开发的新调制方法通过将细胞外囊泡分开而无需聚集，可以比常规方法更准确。基于这种调整方法，我们研究了使用HUH-7作为肝细胞癌衍生的细胞系和OUMS-36从培养上清液中净化细胞外囊泡的条件，并将其作为非癌细胞系。将来，我们计划通过质谱法使用纯化的细胞外囊泡分析表达的蛋白质，以鉴定在源自肝癌作为候选标志物的细胞系中高度表达的蛋白质。另一方面，在使用临床标本的分析中，将使用已经获得的标本对糖尿病和肝癌病例的血液外囊泡进行候选蛋白表达分析。此外，在这项研究中，使用糖尿病作为对照病例，重要的是要阐明在肝癌外细胞囊泡中专门表达的蛋白质，因此我们参与了同类研究中的标本，以便获得可以获得可以与非糖尿病患者进行非糖尿病患者的血液标本，并将其比较。该公司刚刚开始并实施了一年半的一系列流程，包括样本处理，管理和各种检查请求。