歯周組織におけるリゾリン脂質シグナルと歯根吸収メカニズムの解析

牙周组织溶血磷脂信号及牙根吸收机制分析

基本信息

批准号：
19K10393
负责人：
岡山三紀
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Health Sciences University of Hokkaido
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K10393/
关键词：
歯周組織リゾリン脂質メカニカルストレス歯根吸収脂質

项目摘要

2020年度はCOVID-19の影響によりヒト抜去歯より歯根膜組織サンプル採取が中止となり、感染拡大予防のため施設が一時的に使用できなくなり、新規ヒト歯根膜線維芽細胞サンプルを確保と実験が出来なかった。細胞実験はCOVID-19禍以前のストックサンプルを用いてコントロール実験と歯根膜培養細胞にメカニカルストレスを負荷し、定量PCR法によって歯根膜マーカー等の遺伝子発現の変化と、リゾリン脂質（LPA）受容体とLPA合成酵素のmRNA発現を再検討した。遺伝子発現は予備実験結果と同様の発現が確認され、LPA受容体ではLPA1とLPA6の強い発現が認められた。LPA3とLPA4に僅かな発現が認められた。LPA2とLPA5の発現は認められなかった。LPA合成酵素に関しては、LPAの合成経路にはlyso－PLDと、ホスファチジン酸（PA）からPA－PLA1αによって合成される経路もあるため、2つの合成酵素、lyso－PLDとPA－PLA1αの発現検討を行った。lyso－PLDの強い発現が認められたが、PA－PLA1αは認められなかった。動物実験においては、糖尿病が唾液腺の副交感神経性血流増加反応に与える影響を自然発症型の2型糖尿病ラットを用いて、舌神経刺激はラットの唾液腺に刺激頻度と強度に依存した血流増加反応を誘発させたが、耳下腺の血流増加はコントロールラットと比較して糖尿病ラットで有意に低かった。耳下腺の血流増加反応は自律神経節遮断薬であるヘキサメソニウムおよびムスカリン受容体拮抗薬であるアトロピンの静脈内投与により著しく抑制された。アセチルコリンの静脈内投与は耳下腺に濃度依存的な血流増加反応を誘発させたが、その反応はコントロールラットと比較して糖尿病ラットで有意に低かった。耳下腺におけるムスカリンM1、M3ｍRNA発現はコントロールラットと比較して糖尿病ラットで有意に低かった。

2020财年，由于COVID-19的影响，取消了从拔除的人类牙齿中采集牙周膜组织样本的工作，并且该设施暂时无法使用以防止感染传播，因此无法确保并实验新的人类牙周膜没有成纤维细胞样本。细胞实验是使用COVID-19大流行之前的库存样品进行的对照实验，对牙周膜培养细胞施加机械应力，并使用定量PCR测量牙周膜标记物和溶血磷脂（LPA）受体等基因表达的变化并重新检查LPA合酶的mRNA表达。证实基因表达与初步实验结果相似，在LPA受体中观察到LPA1和LPA6的强表达。在 LPA3 和 LPA4 中观察到轻微表达。没有观察到LPA2和LPA5的表达。关于LPA合酶，LPA合成途径包括lyso-PLD和由磷脂酸(PA)合成PA-PLA1α的途径，因此我们研究了lyso-PLD和PA-PLA1α这两种合酶的表达。。观察到 lyso-PLD 的强表达，但 PA-PLA1α 没有强表达。在动物实验中，我们使用自发性2型糖尿病大鼠研究了糖尿病对唾液腺中副交感血流量增加反应的影响。舌神经刺激增加了大鼠唾液腺中的血流量，具体取决于刺激的频率和强度。引起反应后，与对照大鼠相比，糖尿病大鼠腮腺血流量的增加明显较低。静脉注射六甲铵（一种自主神经节阻滞剂）和阿托品（一种毒蕈碱受体拮抗剂）可显着抑制腮腺血流反应的增加。静脉注射乙酰胆碱会引起腮腺血流反应的浓度依赖性增加，与对照大鼠相比，糖尿病大鼠的血流反应明显较低。糖尿病大鼠腮腺中毒蕈碱 M1 和 M3 mRNA 表达显着低于对照大鼠。