脂肪組織由来幹細胞を用いた顎骨再生医療開発のための基礎的研究

利用脂肪组织干细胞开发颌骨再生医学的基础研究

• 批准号: 19K10296
• 负责人: 松本 剛一
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kanazawa Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K10296/
• 关键词: 脂肪組織由来幹細胞; 骨再生; 足場; β-TCP; ゼラチンスポンジ; osteoblasts; endotherial cells; 脱分化脂肪細胞; 骨芽細胞; 再生医療; 脂肪組織由来幹細胞; 骨再生; 足場; β-TCP; ゼラチンスポンジ; osteoblasts; endotherial cells; 脱分化脂肪細胞; 骨芽細胞; 再生医療

方法①脂肪幹細胞(ASC)から骨芽細胞の誘導：６-８週齢SD系♀(XX)ラットの鼠蹊部、後腹壁脂肪組織をコラーゲナーゼ処理した後に遠心分離を行いASCを採取。採取したASCをサプリメント（0.1μMデキサメタゾン、50μgアスコルビン酸、10mMβグリセロフォスフェイト）を添加した骨分化誘導培地で3週間培養して骨芽細胞（培養骨）を誘導した。②①で採取したASCあるいはサプリメントで誘導した培養骨をβTCP含有のゼラチンスポンジ（担体）に播種し、ラット頭蓋骨欠損部位に移植して骨再生治療を行った。結果①ASCにサプリメントを添加して培養を行うと、1週間後にアルカリフォスファターゼ活性の上昇がみられ、3週間後には細胞にノジュールの形成がみられ、アリザリンレッド染色で陽性を示す、骨芽細胞の誘導が確認された。②ASCおよび培養骨は担体表面に接着して生着することを確認した。③未分化のASCあるいは誘導した培養骨を担体に播種し、ラット頭蓋骨欠損部に移植した。移植8週間後に頭蓋骨を摘出しエックス線解析したところ、対象（担体のみ移植）に比べて、骨欠損部の縮小化がみられ、特に未分化ASCを移植した群において、その傾向が顕著であった。

方法1）从脂肪干细胞（ASCS）中诱导成骨细胞：胶原酶治疗腹股沟和腹膜壁脂肪组织的6-8周大SD雌性（XX）大鼠，然后通过收集ASC进行中心分离并收集。将收集的ASC培养在补充剂（0.1μM地塞米松，50μg抗坏血酸，10 mMβ-甘油磷酸磷酸盐）中培养3周以诱导成骨细胞（培养的骨骼）。 ②将收集在①中的ASC或补充剂诱导的培养的骨骼播种在含有βTCP的明胶海绵（载体）上，并植入大鼠颅骨缺陷的部位以进行骨再生治疗。结果1）当将补充剂添加到ASC并培养中时，一周后观察到碱性磷酸酶活性的增加，三周后在细胞中观察到结节，并确认成骨细胞的诱导，表明艾他蛋白红染色的阳性结果。 2）证实，ASC和培养的骨骼粘附在载体的表面并被植入。 ③将未分化的ASC或诱导的培养骨播种在载体上，并植入大鼠头骨缺陷中。当植入后8周去除头骨时，X射线分析表明，与受试者（仅载体植入）相比，骨缺损减少了，在植入未分化的ASC的组中，这种趋势尤其明显。