Development of evaluation system for frozen and aged oocytes / ova using membrane potential measurement

使用膜电位测量开发冷冻和老化卵母细胞/卵子的评估系统

基本信息

批准号：
19K09807
负责人：
三宅将生
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K09807/
关键词：
膜電位卵細胞胚生殖医療体外受精胚盤胞体外授精

项目摘要

今年度もマウスから卵を採取し、媒精後、その発生過程における胚の電位測定を実施して、電位測定の特性とゼロ電位胚の特徴を検索した。卵への電極刺入時には、まず針先が透明帯を貫通する必要がある。胚の電位測定においては、この透明帯貫通時に一旦マイナスの電位を示し、その後深く刺入したのちにはプラスを示すという二相性が見られる。この現象は、採卵時のマウスの週齢が4週齢でも9週齢でも、同様に観察されている。しかし、ゼロに近い電位を示す胚や透明帯除去胚ではあまり観察されない。本年はこうした現象と凍結融解操作との間の関係性の有無について検討した。その結果、凍結融解胚、新鮮胚ともに、透明帯除去によって二相性の電位が消失していることが確認された。すなわち、凍結融解操作の有無にかかわらず、透明帯の電位測定に対する影響が示唆された。未受精卵でも同様に、凍結融解操作の有無によらず、透明帯除去による二相性電位の消失が観察された。なお、EDTAやEGTAなどキレート剤の添加や、顆粒膜細胞除去時および透明帯消化時の酵素処理条件（酵素濃度および細胞外液のイオン組成）はこうした結果に影響を与えなかった。一方で、電位測定後に振り分けた胚の発現パターン解析などの分子生物学的実験を予定していたが、胚数を増やして実験を行う必要が生じたため、これは次年度に先送りすることとした。これら上記の内容の一部は、主に日本生理学会第100回記念大会において発表された。

今年同样从小鼠体内采集卵子，在授精后测量胚胎发育过程中的电位，寻找电位测量的特征和零电位胚胎的特征。将电极插入鸡蛋时，针尖必须首先刺入透明带。在测量胚胎的电位时，存在双相模式，一旦穿透透明带电位为负，而在更深地穿透后电位变为正。无论小鼠在采卵时是4周大还是9周大，都观察到了这种现象。然而，在接近零电位的胚胎或去除透明带的胚胎中很少观察到这种情况。今年，我们调查了这些现象与冻融操作之间是否存在关系。结果证实，在冷冻和解冻的胚胎以及新鲜胚胎中去除透明带后，双相电位消失。换句话说，表明无论有无冻融操作，透明带的电位测量都会受到影响。类似地，在未受精卵中，无论是否进行冷冻和解冻操作，都观察到由于透明带去除而导致双相电位消失。请注意，在颗粒细胞去除和透明带消化过程中添加螯合剂（例如 EDTA 和 EGTA）以及酶处理条件（酶浓度和细胞外液的离子组成）不会影响这些结果。另一方面，原本计划对测定电位后分配的胚胎进行表达模式分析等分子生物学实验，但由于需要进行更多胚胎的实验，所以决定推迟到下一次。年。。上述部分内容主要是在日本生理学会成立100周年大会上发表的。