NTCP吸着後のB型肝炎ウイルス細胞進入機構の解析

NTCP吸附后乙型肝炎病毒进入细胞机制分析

• 批准号: 19J21455
• 负责人: 佐宗 若奈
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J21455/
• 关键词: B型肝炎ウイルス; HBV; NTCP; 細胞侵入; Gタンパク質共役受容体; entry; EGFR; GPCR

これまでの研究により見出されたG蛋白質共役受容体(GPR)はsodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP)の細胞内局在を制御しており、B型肝炎ウイルス (HBV)はこの制御機構を利用して細胞進入している可能性が示唆された。GPRのノックダウンは、NTCPを介したHBVの細胞吸着を低下させたため、細胞膜上のNTCP発現量を検出すると、GPRのノックダウンによって細胞膜上のNTCP発現が低下していた。このときNTCPの細胞内局在を免疫蛍光法によって観察すると、通常は細胞膜上に集積するNTCPが、GPRノックダウン細胞では細胞内に顆粒状になって局在していた。NTCPの分解を阻害するbafilomycin A1を処理すると、通常 細胞膜上に局在するNTCPがGPRノックダウンにより細胞内へ局在変化する様子がより顕著に観察された。一方、GPRを過剰発現させた細胞では、細胞表面のNTCP発現が増加し、HBV感染も1.5倍に増加した。これら結果より、GPRはNTCPの局在を制御することで細胞のHBV感染感受性を制御することが示唆された。これまでGPRの生理活性リガンドがGPRに結合すると下流シグナルを活性化することが示されている。GPR生理活性リガンドを細胞に処理すると、HBV感染の増加が認められた。このときNTCP依存的に結合するpreS1-probeの細胞吸着が増加していた。つまりNTCPの局在は、GPRの下流シグナルの活性により制御される可能性が考えられた。これら研究成果を足がかりとし、今後さらにウイルスの細胞進入制御メカニズムの解析が進めば、ウイルスの増殖様式や感染感受性決定機序の理解だけでなく、宿主因子の新しい生理機能の解明や、新規の抗ウイルス戦略の開発にも繋がると期待される。

先前的研究发现，G蛋白偶联受体（GPR）控制牛磺胆酸钠共转运多肽（NTCP）的细胞内定位，乙型肝炎病毒（HBV）可能利用这种控制机制。进入细胞。 GPR的敲低减少了NTCP介导的HBV对细胞的吸附，因此当我们检测细胞膜上NTCP表达量时，我们发现GPR的敲低减少了细胞膜上NTCP的表达。此时，当通过免疫荧光观察NTCP的细胞内定位时，发现通常在细胞膜上积累的NTCP在GPR敲低细胞中以颗粒的形式定位在细胞内。当用抑制 NTCP 降解的巴弗洛霉素 A1 处理时，观察到通常位于细胞膜上的 NTCP 由于 GPR 敲低而更清晰地定位在细胞内。另一方面，在过表达GPR的细胞中，细胞表面NTCP表达增加，HBV感染也增加1.5倍。这些结果表明GPR通过控制NTCP的定位来控制细胞对HBV感染的易感性。研究表明，GPR 的生物活性配体与 GPR 结合时会激活下游信号。当用 GPR 生物活性配体处理细胞时，观察到 HBV 感染增加。此时，以 NTCP 依赖性方式结合的 preS1-探针的细胞吸附增加。换句话说，NTCP的定位可能由探地雷达下游信号的活动控制。如果以这些研究成果为立足点，进一步分析控制病毒进入细胞的机制，我们不仅能够了解病毒的生长方式和决定感染易感性的机制，还能阐明新的生理机制。宿主因子的功能和新抗炎剂的开发预计这将导致病毒策略的发展。

项目成果

The machinery for endocytosis of epidermal growth factor receptor coordinates the transport of incoming hepatitis B virus to the endosomal network

表皮生长因子受体的内吞作用机制协调传入的乙型肝炎病毒向内体网络的运输

• DOI: 10.1074/jbc.ac119.010366
• 发表时间: 2019-12-12
• 期刊: The Journal of Biological Chemistry
• 作者: Masashi Iwamoto;Wakana Saso;Kazane Nishioka;Hirofumi Ohashi;Ryuichi Sugiyama;A. Ryo;M. Ohki;J. Yun;Sam;T. Ohshima;R. Suzuki;H. Aizaki;M. Muramatsu;T. Matano;S. Iwami;C. Sureau;T. Wakita;Koichi Watashi
• 通讯作者: Koichi Watashi

タマサキツヅラフジ由来アルカロイド含有製剤

玉崎藤藤提取物中含有生物碱的制剂

• 发表时间: 2021

Indiana University(米国)

印第安纳大学（美国）

MAX BioPharma(米国)

MAX BioPharma（美国）

INTS(フランス)

INTS（法国）