安定同位体標識アミノ酸を用いた質量分析計による薬剤耐性菌検出法の確立

稳定同位素标记氨基酸质谱耐药菌检测方法的建立

基本信息

批准号：
19K08927
负责人：
渡智久
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kameda University of Health Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K08927/
关键词：
MALDI-TOF MS SILAC 薬剤耐性菌

项目摘要

近年提唱されている安定同位体標識法を前処理に利用するSILAC法は、抗菌薬原末の使用による煩雑な操作や薬剤耐性の判定が目視であることに課題がみられ、臨床現場での実用化に至っていない。本研究では、①SILAC法に薬剤ディスクを使用して簡便化を図ること,②SILAC法で処理した臨床由来の薬剤耐性株のマススペクトルをリファレンスライブラリーに登録することの2つによって、薬剤耐性菌の検出の自動判定を可能にすることを目的としている。臨床分離株の測定では、MSSA株を高率に識別できるが、MRSA株の判定能が低確率であるという課題が残されていたため、解析方法の変更を検討することとした。当初のMRSAのマススペクトルのリファレンスライブラリーへの登録による自動判定を中止し、ブルカー社のCliniProtools 3.0を使用し、薬剤耐性菌の判定法を確立できるかを検討することとした。培養液①Normal（通常のアミノ酸含有培地）、培養液②Heavy（安定同位体含有培地）、培養液③Heavy（安定同位体含有培地）＋薬剤ディスクの3種類の培養液で処理したMRSAのマススペクトルをCliniProtools 3.0のGenetic Algorithm（GA）、Supervised Neural Network（SNN）およびQuick Classifier（QC）の各統計処理によってクラスタリングを行ったが、培養液①と培養液②のマススペクトルはMSSAとMRSAでは大きな相違がみられないため、培養液③についてのみMSSAとMRSAをクラスタリングし、unknownなS. aureusがMSSAとMRSAのどちらに分類されるかを検討すれば良いということが判明した。

SILAC方法使用了近年来提出的稳定的同位素标记方法，它遇到了问题，因为它使用抗生素粉并在视觉上检测到药物耐药性很复杂，并且在临床环境中尚未实用。这项研究的目的是通过1）简化在SILAC方法中使用药物碟片自动检测耐药细菌，以及2）在参考文献中使用SILAC方法处理的临床衍生药物抗药性菌株的质谱。在测量临床分离株时，可以以高速率鉴定MSSA菌株，但是仍然存在确定MRSA菌株的能力较低的问题，因此我们决定考虑更改分析方法。通过在参考库中登记了MRSA原始质谱的自动确定，该公司决定考虑使用Bruker的Cliniprotools 3.0来确定是否可以建立一种确定耐药细菌的方法。 The mass spectra of MRSA treated with three types of cultures: 1. Normal (normal amino acid-containing medium), 2. Heavy (stable isotope-containing medium), 3. Heavy (stable isotope-containing medium) and 3. Heavy (stable isotope-containing medium) and drug disc were clustered using statistical treatments of CliniProtools 3.0 Genetic Algorithm (GA), Supervised Neural Network (SNN) and Quick分类器（QC）。但是，在MSSA和MRSA的质谱中，MSSA和MRSA之间没有显着差异，因此只有3个。MSSA和MRSA聚集，并且未知S.已发现，应考虑将金黄色属于MSSA或MRSA。

项目成果

期刊论文数量（1）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

安定同位体標識アミノ酸を用いた質量分析計による MRSAの検出に関する研究

使用稳定同位素标记氨基酸的质谱仪检测 MRSA 的研究

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
秀川智春;國下洋輔;吉見竜介;櫻井菜月;三橋正季;杉山裕美子;岸本大河;飯塚友紀;小宮孝章;永井秀人;濱田直樹;土田奈緒美;副島裕太郎;神山玲光;小林幸司;浅見由希子;桐野洋平;矢嶋宣幸;佐田憲映;一瀬邦弘;大野滋;中島秀明;佐藤　真央
通讯作者：
佐藤　真央