Gene edition in endangered endemic fish for the ptoduction of immunodeficient recipient to generate oocytes through trnasplantation

濒危特有鱼类的基因编辑，用于通过移植诱导免疫缺陷受体产生卵母细胞

基本信息

批准号：
20K06100
负责人：
高田達之
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Ritsumeikan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

絶滅危惧種の保全を目的とし、琵琶湖固有種ホンモロコ(Gnathopogon caerulescens)を用いて精原細胞の凍結保存、及び精子の完全in vitro培養を確立してきた。一方で卵子のin vitro培養に関しては、ある程度の成長は認められるが受精可能な卵子生産は困難であったことから生殖幹細胞の移植による卵子作製を目的とし、ゲノム編集による免疫寛容個体の作製を試みた。これまでにrag2ヘテロ変異体として(+7/wt)、(+8/wt)、(+2/wt)の3系統を確立することができた。これらは野生型wtとほぼ変わらない飼育が可能であった。ホモ変異体の作製のため、春に人工催熟を試みた。雄は例年通り性成熟が認められ、精子を生産したが雌では性成熟する個体数は少なく、成熟した個体も産卵しなかった。そこでホルモン注射による人工授精を試みたが得られた卵子は全て過熟卵であった。雌においては現在の実験室飼育環境下、及び人工催熟方法では性成熟に1年以上を有すると考えられた。昨年度、通常繁殖期とは異なる秋に人工催熟により両アリルにそれぞれ異なる変異を有するrag2変異体(+7/-4)を作製することができた。これらの育成を行い、wtと同様に飼育可能であったことから今回作製したrag2変異体は野生型WTと同様な飼育環境下での飼育維持が可能であることが明らかとなった。現在rag2ヘテロ変異体(+7/wt)、(+8/wt)、(+2/wt)およびrag2変異体(+7/-4)においてもwt同様の人工催熟を行い、メスと思われる個体においても腹部の膨大から性成熟の進行を確認している。rag2変異体(+7/-4)の性成熟が認められることからrag2ホモ変異体が卵子作成のための移植実験に使用可能であると考えられる。

为了保护濒临灭绝的物种，我们建立了精原细胞冷冻保存技术，并利用琵琶湖特有物种Gnathopogon caerulescens完成了精子的体外培养。另一方面，对于卵子的体外培养，虽然观察到了一定程度的生长，但很难产生可以受精的卵子，因此我们尝试通过基因组编辑来创建免疫耐受个体，目的是产生卵子通过移植生殖干细胞。到目前为止，我们已经能够建立三个rag2杂合突变株系：(+7/wt)、(+8/wt)和(+2/wt)。这些动物的饲养方式几乎与野生型野生型相同。为了创造纯合突变体，尝试在春季进行人工成熟。观察到雄性如常达到性成熟并产生精子，但只有少数雌性达到性成熟，甚至成熟的也不会产卵。因此，尝试使用激素注射进行人工授精，但获得的卵子都熟透了。在目前的实验室饲养环境和人工成熟方法下，雌性被认为需要一年多的时间才能达到性成熟。去年，我们通过与正常繁殖季节不同的秋季人工成熟，创造了两个等位基因具有不同突变的rag2突变体（+7/-4）。它们的繁殖和饲养方式与野生型相同，表明本次创建的rag2突变体可以在与野生型WT相同的饲养环境中维持。目前，rag2异种突变体(+7/wt)、(+8/wt)、(+2/wt)和rag2突变体(+7/-4)以与wt相同的方式进行人工成熟，并被被认为是女性。从暴露于该疾病的个体的腹部增大证实了性成熟的进展。由于观察到rag2突变体(+7/-4)的性成熟，因此认为rag2纯合突变体可用于卵母细胞产生的移植实验。

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification of TEKTIN1-expressing multiciliated cells during spontaneous differentiation of non-human primate embryonic stem cells

非人灵长类胚胎干细胞自发分化过程中表达 TEKTIN1 的多纤毛细胞的鉴定

DOI：
10.1111/gtc.13031
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
2.1
作者：
Nishie T.; Ohta Y.; Shirai E.; Higaki S.; Shimozawa N.; Narita K.; Kawaguchi K.; Tanaka H.; Mori C.; Tanaka T.; Hirabayashi M.; Suemori H.; Kurisaki A.; Tooyama I.; Asano S.; Takeda S.; Takada T.
通讯作者：
Takada T.

Alteration in peritoneal cells with the chemokine CX3CL1 reverses age-associated impairment of recognition memory

趋化因子 CX3CL1 改变腹膜细胞可逆转与年龄相关的识别记忆损伤