膵島脂肪由来幹細胞シートにおける皮下と肝表面移植成果及び免疫応答能の差異の検討

胰岛脂肪干细胞片皮下和肝表面移植结果和免疫应答能力差异的检查

基本信息

批准号：
19K23608
负责人：
池田貴裕
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-08-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

膵島移植の成績向上のため、細胞シート工学を用いた皮下移植が研究されてきた。我々は、糖尿病ラットへの膵島/間葉系幹細胞(MSC)複合シート皮下移植での耐糖能改善、MSCの中でも脂肪由来幹細胞(ADSC)の有用性を報告した。一方膵島単体シートでは、マウスで皮下より肝表面移植の方が血糖正常化に優れていたと報告された。しかし、ヒトへの応用を考えた場合、肝表面移植は臨床的には侵襲が大きいと考えられる。膵島/ADSC複合シートであれば、血管新生誘導/ 膵島細胞保護効果により皮下移植でも肝表面移植と同等な成績が期待できると考えた。糖尿病モデルマウスの作製、共培養シート作製手技、ラット膵島の分離手技の安定化を図っていた。膵臓の消化に用いるコラゲナーゼを注入するため、ラットの胆管へカニュレーションする技術が必要であり、手技獲得に時間を要した。手技が安定したところで膵島分離を行い、動物実験施設でラット膵臓へのコラゲナーゼ（リベラーゼTL）注入、膵全摘などを行い、当科実験室で振盪、ろ過、濃度勾配液を加えての遠心処理等を行って膵島の分離を行った。また、ラットADSCについては専門業者から購入したものを使用した。ADSCが推奨培地で増殖しない問題があり難渋したため、シート作製に移行するまでに時間を要した。培地の変更により、ADSCの増殖を確認でき、シート作製にとりかかった。膵島分離の5日前にADSCを播種して増殖させコンフルにさせた上で、膵島分離を行い、ラット膵島を播種して膵島/ADSCシートの作製を行った。昨年度、実際に膵島/ADSCシートを糖尿病マウスに移植しているが、うまく生着していない。今年度も引き続き移植実験を継続し、血糖の変化について検討している。

为了提高胰岛移植的效果，对利用细胞片层工程的皮下移植进行了研究。我们报道称，将胰岛/间充质干细胞（MSC）复合片皮下移植到糖尿病大鼠体内可改善葡萄糖耐量，并提高间充质干细胞中脂肪源性干细胞（ADSC）的有用性。另一方面，据报道，单胰岛片的肝表面移植在使血糖正常化方面比小鼠皮下移植更好。然而，当考虑应用于人类时，肝表面移植被认为在临床上具有高度侵入性。我们相信，如果使用胰岛/ADSC复合片，由于其血管生成诱导/胰岛细胞保护作用，即使皮下移植，我们也可以期待与肝表面移植相当的结果。目的是创建糖尿病模型小鼠、稳定共培养片制备技术和大鼠胰岛分离技术。为了注射用于消化胰腺的胶原酶，需要一种在大鼠胆管中插管的技术，并且需要时间来掌握该技术。一旦技术稳定，进行胰岛分离，将胶原酶（Liberase TL）注射到大鼠胰腺中，并在动物试验设施中进行全胰腺切除术，然后添加浓度梯度溶液进行摇动、过滤和离心在我们的实验室中，使用以下方法分离胰岛。此外，使用从专业供应商购买的大鼠 ADSC。这很困难，因为 ADSC 在推荐的培养基中无法增殖，因此需要一些时间才能进入片材生产。通过更换培养基，我们能够确认 ADSC 的增殖，并开始制作片材。胰岛分离前5天，接种ADSC，使其增殖并汇合，然后进行胰岛分离，接种大鼠胰岛以制备胰岛/ADSC片。去年，我们实际上将胰岛/ADSC片移植到糖尿病小鼠体内，但它们的效果并不好。今年我们将继续进行移植实验，并正在检查血糖的变化。