The new strategy for radioresistance in cancer associated with p53 mutation using targeted alpha therapy

使用靶向α疗法治疗与p53突变相关的癌症的放射抗性新策略

基本信息

批准号：
20H03633
负责人：
坂下哲哉
金额：
$ 11.07万
依托单位：
National Institutes for Quantum Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03633/
关键词：
標的アイソトープ治療 p53 アルファ線悪性褐色細胞腫

项目摘要

がん抑制遺伝子p53は、重要ながんの治療標的分子である。211At標識メタアスタトベンジルグアニジン（以下MABG）は、p53変異がん細胞にも有効である可能性があり、部分的にp53野生型のがんと共通する殺細胞経路の存在も予想される。しかし、これまでにp53変異の有無に対応付けられたα線内用療法の殺細胞メカニズムの研究例はない。そこで、本研究では、「α線内用療法でp53変異型の放射線抵抗性がんを克服できる可能性とその分子メカニズムを明らかにし、新たな治療戦略を、具体的な治療標的分子や細胞死誘導経路の知見から創出する」ことを目的とする。具体的には、（１）p53変異細胞株の作製においては、ゲノム編集によりヒト由来細胞を用いた細胞株の作製を進めた。また、MABGの抗がん作用のノルアドレナリントランスポーター(NET1)依存性を確認するために、NET1発現ベクター構築の検討を進めた。（２）培養細胞の解析では、ラット由来細胞株PC12の放射線抵抗性を調べるソフトアガーコロニー試験法を確立し、MABG処置した細胞について生存率曲線を求めた。また、昨年度成功したγ線照射細胞のシングルセル遺伝子発現解析用試料に加えて、MABG処置した細胞のシングルセル解析の検討を進めた。（３）殺細胞メカニズムの探索では、バルクで採取した坦がんマウス試料についてRNAシーケンス解析を実施できた。加えてγ線照射細胞のシングルセル試料についてRNAシーケンス解析を実施し、更なる解析に必要な試料の見積もりやバイオインフォマティクスツールの選択など、解析フローの整備ができた。（4）動物実験による解析では、PC12腫瘍細胞株の担がんマウスを用いた動物実験を実施し、バルクでのRNAシーケンス解析用試料の採取に成功した。以上、当初の予定通り進んでいる。

抑癌基因p53是癌症的重要治疗靶分子。 211At标记的间位苄基胍（以下简称MABG）可能对p53突变的癌细胞有效，并且还预计存在与p53野生型癌症部分相同的细胞杀伤途径。然而，迄今为止，还没有关于静脉α射线治疗的细胞杀伤机制与p53突变存在或不存在相关的研究。因此，在这项研究中，我们“阐明了用α射线疗法克服p53突变体放射抗性癌症的可能性及其分子机制，并开发了特异性治疗靶分子和细胞死亡等新的治疗策略。”目的是创造基于引导路线知识的信息。具体而言，在(1)p53突变细胞系的制作中，我们利用人类来源的细胞，通过基因组编辑来制作细胞系。此外，为了证实MABG的抗癌作用对去甲肾上腺素转运蛋白（NET1）的依赖性，我们继续构建了NET1表达载体。 (2)对于培养细胞的分析，我们建立了软琼脂集落测试方法来检查大鼠来源的细胞系PC12的放射抗性，并确定MABG处理的细胞的存活率曲线。此外，除了去年成功的γ射线照射细胞的单细胞基因表达分析样品之外，我们还继续进行了MABG处理细胞的单细胞分析研究。 (3)在寻找细胞杀伤机制时，我们能够对大量收集的荷瘤小鼠样本进行RNA序列分析。此外，我们对γ射线照射细胞的单细胞样本进行了RNA序列分析，并能够准备分析流程，包括估计进一步分析所需的样本数量和选择生物信息学工具。 (4)动物实验分析：利用PC12肿瘤细胞系荷瘤小鼠进行动物实验，成功采集到用于bulk RNA序列分析的样品。一切都在按计划进行。