SAF-A/RNA複合体が作り出す転写制御の場の解明

阐明 SAF-A/RNA 复合物产生的转录控制场

基本信息

批准号：
20H03190
负责人：
野澤竜介
金额：
$ 11.32万
依托单位：
Japanese Foundation for Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度までの研究から、RNA分解活性を持つExoribonuclease 2 (XRN2)は、SAF-A/RNA構造体のRNAを分解し、その形成を負に制御することを見出した。さらにXRN2の機能阻害により、核内にRNAが蓄積し、また転写の変動が引き起こされた。これらの観察結果から、適正な転写制御には、XRN2によるSAF-A/RNA構造体を構成するRNAの分解が重要であることが考えられた。これを踏まえて令和4年度は、SAF-A/RNA構造体やXRN2の転写制御への役割を理解することを目指し、XRN2が寄与するRNAの代謝について検討した。1) XRN2によって分解されたRNAが新生RNAに取り込まれるかどうかを検討した。ウリジンのアナログである4SU (4-thio-uridine)を含んだRNAを試験管内で合成し、その4SU-RNAをヒト培養細胞にトランスフェクションした。細胞からRNAを調製し、アクチンやGAPDHといったハウスキーピング遺伝子について解析したところ、XRN2依存的な新生RNAへの4SUの取り込みが確認された。2) XRN2依存的なRNA分解産物の新生RNAへの取り込みについてゲノムワイドに検討した。4SUが取り込まれた新生RNAと、取り込まれていない既存のRNAを、4SUの化学修飾により区別して同定するSLAM-seq (thiol (SH)- Linked Alkylation for the Metabolic Sequencing of RNA)解析を行なった。コントロール細胞では、新生RNAに4SUの取り込みを確認できたが、XRN2をノックダウンした細胞では、有意に4SUの取り込みが減少していた。これらの結果より、SAF-A/RNA構造体を構成するRNAはXRN2を介してリサイクルされることで、適正な転写に寄与していると考えられた。

从研究到去年，具有RNA拆卸活性的Exoribonyclease 2（XRN2）发现SAF-A/RNA结构的RNA被拆卸，形成为负。此外，XRN2函数的功能导致RNA积聚在细胞核中，从而导致转移的波动。从这些观察结果中，可以认为，构成XRN2的SAF-A/RNA结构的RNA的分解对于适当的转移控制很重要。基于此，在Oruwa的第四年，我们检查了XRN2贡献的RNA的代谢，旨在了解SAF-A/RNA结构和XRN2转移控制的作用。 1）我们检查了XRN2分解的RNA是否掺入了新的RNA中。 RNA包含4SU（4-硫尿素），它是尿路汀的类似物，在试管中合成，并将4SU-RNA转移到人类培养细胞中。当从细胞中制备RNA并分析诸如肌动蛋白和GAPDH之类的管家基因时，确认了4SU到XRN2依赖性的新RNA的进口。 2）XRN2在基因组范围内检查了RNA分解产物中的掺入新RNA。 SLAM -SEQ（用于RNA代谢测序的硫醇（SH）连接烷基化）进行了区分新的RNA掺入的RNA，并进行了4SU化学修饰的未构型RNA。在对照细胞中，在新的RNA中证实了4SU的掺入，但是在击倒XRN2的细胞中，4SU的掺入显着降低。从这些结果中可以认为，构成SAF-A/RNA结构的RNA通过通过XRN2进行回收来促进适当的转录。