ブタエピブラスト幹細胞とそのクローン胚による始原生殖細胞の遺伝子機能解析

利用猪外胚层干细胞及其克隆胚胎对原始生殖细胞进行基因功能分析

基本信息

批准号：
20H03167
负责人：
小林俊寛
金额：
$ 11.15万
依托单位：
The University of Tokyo (2021-2023)National Institute for Physiological Sciences (2020)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03167/
关键词：
始原生殖細胞エピブラスト幹細胞ブタ多能性幹細胞

项目摘要

NANOS3-tdTomato クローン胚の作製NANOS3-tdTomato ブタエピブラスト幹細胞の核をドナーとし、ブタ未受精卵へ体細胞核移植を行い、エピブラスト幹細胞の遺伝子型を持ったクローン胚作製を行った。ドナー細胞核として、細胞周期などの最適な条件を予備実験により検討した後、in vitro で胚盤胞形成率の評価、さらには子宮移植後の胚発生能評価を行った。クローン胚の解析は、顕著な数のPGC が生殖巣で見られる胎生26-30 日目に行い、生殖巣におけるNANOS3-tdTomato の発現を蛍光観察した。その結果、期待していた通り NANOS3-tTomato の発現は生殖巣のみで認められ、免疫染色による始原生殖細胞マーカー発現の確認により、それらレポーターが始原生殖細胞特異的に発現していることを明らかにした。以上、エピブラスト幹細胞の樹立およびそれらの遺伝子改変およびそれを元にしたクローン胎児の作製までを論文として報告した (Kinoshita, Kobayashi et al., Development (2021))。

NANOS3-tdTomato克隆胚胎的制备以NANOS3-tdTomato猪外胚层干细胞核为供体，将体细胞核移植到未受精的猪卵中，产生具有外胚层干细胞基因型的克隆胚胎。在通过初步实验考察供体细胞核的细胞周期等最佳条件后，我们评估了体外囊胚形成率，并进一步评估了子宫移植后的胚胎发育潜力。在胚胎第26-30天对克隆胚胎进行分析，此时在性腺中观察到大量PGC，并使用荧光观察性腺中NANOS3-tdTomato的表达。正如预期的那样，NANOS3-tTomato 表达仅在性腺中观察到，并且通过免疫染色确认原始生殖细胞标记物的表达表明这些报告基因在原始生殖细胞中特异性表达。上面，我们在一篇论文中报道了外胚层干细胞的建立、它们的基因修饰以及基于它们的克隆胎儿的创建（Kinoshita、Kobayashi 等人，Development (2021)）。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

円盤状胚盤を形成する哺乳類から樹立した多能性幹細胞とその利用

从哺乳动物中建立的形成盘状盾片的多能干细胞及其用途

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
Toshihiro Kobayashi;Teppei Goto;Mami Oikawa;Makoto Sanbo;Yasuhiro Kazuki;Hiromitsu Nakauchi;Azim M Surani;Masumi Hirabayashi;小林俊寛
通讯作者：
小林俊寛

Blastocyst complementation using Prdm14-deficient rats for robust germline transmission

使用 Prdm14 缺陷大鼠进行囊胚互补以实现稳健的种系传播

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Toshihiro Kobayashi;Teppei Goto;Mami Oikawa;Makoto Sanbo;Yasuhiro Kazuki;Hiromitsu Nakauchi;Azim M Surani;Masumi Hirabayashi
通讯作者：
Masumi Hirabayashi

Tracing the emergence of primordial germ cells from bilaminar disc rabbit embryos and pluripotent stem cells

DOI：
10.1016/j.celrep.2021.109812
发表时间：
2021-10-12
期刊：
CELL REPORTS
影响因子：
8.8
作者：
Kobayashi, Toshihiro;Castillo-Venzor, Aracely;Surani, M. Azim
通讯作者：
Surani, M. Azim

生理学研究所遺伝子改変動物作製室 HP

国立生理科学研究所转基因动物生产实验室HP

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

University of Exeter/The University of Nottingham(英国)

埃克塞特大学/诺丁汉大学（英国）

DOI：
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小林俊寛其他文献

ラットRosa26 遺伝子座の同定と全身性に tdTomato 遺伝子を発現するノックインラットの作製

大鼠Rosa26基因位点的鉴定及系统表达tdTomato基因的敲入大鼠的产生

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tanave A.;Ishii A.;Shiroishi T.;Takahashi A.;Koide T.;根本知己;Kobayashi T;石井亜矢子,西明紀,高橋阿貴,城石俊彦,小出剛;平林真澄;根本知己;小出剛;小林俊寛
通讯作者：
小林俊寛